Биоавтографический метод

К настоящему времени описано более 2000 антибиотических веществ, и это число продолжает непрерывно увеличиваться. В крупных лабораториях и институтах, ведущих поиски новых антибиотиков, за год обследуют многие тысячи продуцентов, причем, как показала практика, большинство выделяемых антибиотиков уже известно и, следовательно, их очистка и дальнейшее изучение нецелесообразны. Поэтому при изыскании новых антибиотиков одним из самых важных вопросов является определение степени новизны выделенных препаратов на наиболее ранних стадиях изучения. Достоинства метода хроматографии на бумаге, о которых говорилось выше, делают его в сочетании с биоавтографическими методами обнаружения особенно эффек- [c.68]

При дневном свете можно обнаружить 2 цг желтой фолиевой кислоты, такое же количество в УФ-свете в виде абсорбционных пятен и после обработки хлором и опрыскивания смесью о-толидин — иодат калия (реактив № 32) — 0,5 цг в виде серого пятна. Этой цветной реакции мешает, однако, обработка пластинки аммиаком, поэтому было бы очень желательно использовать более подходящ,ий растворитель. Обнаружение можно осущ,ествить и с помощ,ью других реактивов [65]. Для определения пригодны также чувствительные биоавтографические методы. [c.245]

В эту группу входят методы обнаружения биологически активных соединений. В биоавтографических методах при обнаружении стимуляторов роста или витаминов определяется степень роста зон микроорганизмов, а при обнаружении антибиотиков или антиметаболитов — степень их ингибирования. К сожалению, эти весьма специфические методы требуют очень много времени — от нескольких часов до нескольких дней. Обнаруживаются такими методами только биологически активные соединения, причем неактивные соединения обнаружению не мешают. Чтобы ускорить получение результатов, обычно проводят обнаружение одним из химических методов, после чего проводят биологическую пробу. [c.118]

Биоавтографические методы позволяют обнаружить антибиотик даже в том случае, если он содержится в препарате в незначительном количестве и к тому же в смеси с другими веществами. С этой точки зрения такие методы можно считать прямыми способами обнаружения антибиотиков на хроматограммах в отличие от химических и физических, которые являются косвенными. Биоавтографические методы можно применять уже тогда, когда об изучаемом антибиотике известно лишь, что он подавляет определенные тест-микробы. Физические и химические методы можно использовать только в том случае, если определены некоторые физические или химические свойства антибиотика, т. е. на более поздних стадиях исследования. [c.7]

Биоавтографические методы обнаружения антибиотиков [c.7]

Обычно при биоавтографическом методе используют лотки, в которые заливают агар с тест-микробом. Дном лотка служит лист стекла или плексигласа, к которому приклеивают или прикрепляют при помощи винтов боковые стенки. Конструкция одного из таких лотков представлена на рис. 3. Кроме того, предложена модификация биоавтографического метода, при которой лотки не требуются. В этом случае хроматограммы погружают в расплавленный агар, засеянный тест-микробом, и затем вынимают из агара и инкубируют во влажной камере. Утверждают, что такая модификация является более чувствительным методом, чем обычная биоавтография [33]. [c.9]

Биоавтографический метод использовали при изучении предшественников некоторых антибиотиков. Для этого продуцент засевали на чашки Петри, рядом с колонией продуцента помещали часть хроматограммы культуральной жидкости. В том случае, если часть хроматограммы содержала предшественник, то вокруг нее появлялась зона подавления [78, 79]. [c.13]

Многие биологически активные вещества — токсины, фармакологические препараты и т. д. — обладают также антимикробным действием. В некоторых случаях химические и физические способы обнаружения таких препаратов не разработаны, поэтому при их хроматографировании применяют биоавтографические методы [46, 81, 82]. [c.13]

Биоавтографические методы используют также в сочетании с физическими и химическими. В случае совпадения зон подавления тест-микроба с окрашенными пятнами после действия каким-либо реагентом можно считать, что изучаемый антибиотик дает эту качественную реакцию даже и в том случае, если он находится в смеси с другими веществами. [c.21]

Наиболее общими способами обнаружения антибиотиков на хроматограммах можно считать биоавтографические методы, позволяющие выявить антибиотики среди большого числа самых различных веществ. Это обстоятельство дает возможность использовать хроматографию на бумаге при проведении разнообразных исследований. [c.21]

В частности, сочетание такого высокоразрешающего метода, как хроматография на бумаге, с очень чувствительным и избирательным биоавтографическим методом обнаружения позволяет изучать превращения антибиотиков как в химических реакциях, так и в биологических системах при биосинтезе, в организме животных, человека, растений, в почве и т. д. При помощи хроматографии можно провести количественное определение отдельных компонентов смеси антибиотиков без их препаративного разделения. [c.21]

При выделении и очистке бумажная хроматография может использоваться не только как аналитический метод, но и как препаративный. В этом случае хроматографирование проводят или в пачке листов хроматографической бумаги [305], или на одном листе бумаги обычным методом. Препаративная хроматография на бумаге имеет некоторые преимущества перед другими методами легкость подбора условий для разделения, очень простой переход от аналитических опытов к препаративным, возможность работать с минимальными количествами препаратов, методическая простота. Хотя теми же достоинствами обладает и хроматография в тонком слое адсорбента, все же бумажная хроматография удобнее при работе с антибиотиками, так как при помощи биоавтографического метода антибиотики проще выявлять на бумаге, чем на тонкослойной пластинке. В некоторых [c.34]

Опыт хроматографической классификации антибиотиков показывает, что аналогичные методы могут быть применены также и при изучении других биологически активных веществ неизвестной природы витаминов и факторов роста, токсинов, антагонистов антибиотиков и т. д., т. е. всегда, когда можно использовать биоавтографические методы обнаружения. [c.111]

Антибиотик SQ-15.859 в системах I, 2, 3 и 4 (состав указан на стр. 115) характеризуется величинами Rf 0,95 0,01 0,97 и 0,94 соответственно. Выявление антибиотика проводили биоавтографическим методом с клетками саркомы [40]. [c.174]

Биоавтографические методы разработаны также для противовирусных и противофаговых антибиотиков [43—47] (для выращивания вирусов использовали культуры тканей), В качестве [c.9]

Некоторые антибиотические препараты представляют смесь компонентов, обладающих синергидным действием (карцино-статин, антибиотики группы стафиломицина). При хроматографировании таких препаратов может произойти разделение компонентов. Поскольку отдельные компоненты обладают более слабой активностью, чем их смесь, то после разделения их обнаружение при помощи биоавтографических методов становится труднее. [c.10]

При использовании биоавтографических методов обнаружения следует учитывать действие малолетучих и нелетучих компонентов систем растворителей на тест-организмы. Для удаления таких компонентов хроматограммы до биопроявления иногда промывали растворителями, в которых хроматографируемые вещества не растворяются [83]. [c.13]

Для выявления биологически неактивных примесей необходимо комбинировать биоавтографический метод с химическими и физическими. Так, например, было выяснено [183], что при хроматографировании ангустмицина выявляются три пятна в случае обработки хроматограммы сначала солями ртути, а затем сернистым аммонием, тогда как при помощи биоавтографического метода можно выявить только один компонент. Эти данные показывают, что препарат ангустмицина содержит, помимо биологически активной фракции, еще и неактивные вещества. В препарате эдеина обнаружено восемь компонентов, дающих реакцию с нингидрином, но только один из них является антибиоти- [c.23]

КОМ [184, 185]. Аналогичное явление отмечено в отношении эно-мицина [42]. При изучении янтинеллина наряду с биоавтографическим методом применяли несколько качественных реакций с перманганатом калия, концентрированной серной кислотой, о-толидином [25]. Во всех этих случаях наблюдалось только одно пятно, совпадающее по положению с зоной подавления тест-микроба. Биоавтографические методы комбинировали также с физическими, проводили обнаружение антибиотиков по поглощению УФ-света, люминесценции [121, 136], а также радиометрическими методами в случае радиоактивных веществ. Если расположение радиоактивного пятна совпадало с зоной подавления, то это доказывало, что в изучаемом препарате меченым является только антибиотик [159, 186, 187] (рис. 15). При помощи хроматографии на бумаге можно не только определить гомогенность радиоактивного препарата, но также вычислить удельную радиоактивность [160, 188], используя количественные биоавтографические методы. [c.24]

Количественную хроматографию на бумаге проводят двумя способами с разрезанием хроматограмм на части и на целых хроматограммах. В первом случае возможны два варианта всю хроматограмму разрезают на небольшие прямоугольники стандартного размера, которые затем отдельно помещают на агаровую пластинку, засеянную тест-микробом. Одновременно на эту же пластинку помещают контрольные куски хроматографической бумаги такого же размера, на которые нанесен стандартный антибиотик в известных количествах. Сравнивая размер зон подавления в опыте и контроле, можно определить содержание антибиотика в различных участках хроматограммы. Такой метод применяли для пенициллинов [6], стрептомицииов [351], ан-тимицинов [314, 352], геликсинов и эндомицинов [284], т. е. тогда, когда, кроме биоавтографического метода, не было других способов выявления веществ на хроматограммах. Если расположение изучаемого вещества можно определить заранее, то при количественных определениях вырезают только зону расположения антибиотика, вещество затем элюируют подходящим растворителем. Для определения содержания антибиотика чаще всего используют спектрофотометрический метод. Таким образом проводили определение тетрациклинов антибиотики и продукты их деградации выявляли по свечению в УФ-свете, для элюирования использовали фосфатный буфер с pH 4,5 или растворы соляной и серной кислот количественные определения проводили микробиологическими или спектрофотометрическими методами [97, 99, 101, 258, 350—355]. Метимицин и близкие антибиотики обнаруживали на хроматограммах в виде коричневых пятен по- [c.36]

Заканчивая этот раздел, следует отметить, что использование хроматографии на бумаге при изучении превращений антибиотиков в организме человека и животных позволяет с относительно небольшой затратой сил и времени достичь таких результатов, которые другими методами получить зачастую весьма затруднительно. При помощи этого метода удалось выяснить пути превращения в организме многих антибиотиков. Показано также, что одним из этапов превращения антибиотиков является образование каких-то, пока еще неидентифицированных биологически активных промежуточных продуктов. Дальнейшие исследования в этом направлении, выяснение структуры таких продуктов и их биологической активности представляет весьма важную задачу. Особенно перспективно использование меченых соединений. В этом случае биоавтографические методы позволяют обнаруживать более близкие продукты превращений, которые очень часто еще сохраняют биологическую активность. Радиоавтографический метод дает возможность выявить продукты дальнейшего распада, лишенные антимикробного действия. [c.55]

Хроматографию на бумаге использовали при изучении циркуляции циклогексимида [542, 543]. Растения выращивали на кварцевом песке, к питательным растворам добавляли циклогексимид. Экстракт частей растений хроматографировали на бумаге Ватман jN 1 в 1 фосфатном буфере pH 6,8 при 22°. Обнаружение антибиотиков проводили биоавтографическим методом, в качестве тест-микроба использовали Sa haromy es pasteurianum. [c.55]

Системы Исиды имеют принципиальные недостатки. Во-первых, этот набор растворителей не составлен на основе какого-нибудь единого принципа, во-вторых, некоторые растворители (например, фенол) крайне неудобны при серийной работе. Незначительные количества фенола, оставшегося на хроматограммах, вызывают подавление тест-микробов при использовании биоавтографических методов. Поэтому такие хроматограммы приходится тщательно высушивать, что задерживает работу. В-третьих, данные хроматографирования в некоторых растворителях не дают ничего нового по сравнению с результатами хроматографирования в других системах. Так, например не наблюдалось различий в поведении 25 антибиотиков при хроматографировании в смеси бутанол — метанол— вода и в такой же смеси с добавлением метилоранжа [653]. [c.72]

Элайомицин (гигроскопин А) в метаноле и ацетоне характеризуется величинами Кг 0,5 и 0,7 соответственно [306] (см. табл. 4). Имеются данные о хроматографическом спектре гигроскопина А [653]. Для его обнаружения использовали биоавтографический метод. [c.115]

Азасерин можно обнаружить на хроматограммах по реакции с нингидрином или биоавтографическим методом (с культурой тканей). Антибиотик характеризуется величинами Кг 0,29 в смеси третичный амиловый спирт — ацетон — вода (9 2,5 7,2) [838] 0,24 — в смеси бутанол — уксусная кислота — вода (25 6 25) (система № 1) 0,87 — в верхней фазе смеси изоами-ловый спирт — 5%-ный раствор двузамещенного фосфата натрия, 1 2 (система № 2) 0,34 —в смеси 400 мл метанола, 1,64 г безводного ацетата натрия и 0,14 мл уксусной кислоты (система № 3) 0,07 — в бутаноле, насыщенном 2 н. аммиаком (система № 4) [40]. [c.115]

Иллудины М и 5 обладают высокой подвижностью при хроматографировании в большинстве органических растворителей и водных системах [ПО, 620, 787]. Обнаружение проводили биоавтографическим методом с использованием сенной палочки. [c.118]

Обнаружение цефалоспоринов Р проводили биоавтографическим методом (сенная палочка, золотистый стафилококк). [c.118]

Пеницилловая кислота может быть выявлена на хроматограммах биоавтографическим методом Ba illus subtilis) [787], а также при помощи реакции с диазотированными 4-бензоил-амино-2,5-деметоксианилином и о-дианизидином [114]. При хроматографировании в воде, 3%-ном растворе хлористого аммония, этилацетате, насыщенном водой, и других системах пеницилловая кислота перемещается почти с фронтом растворителя, в случае бензола, насыщенного водой,— остается на стартовой [c.160]

Микофеноловая кислота. Выявление на хроматограммах проводили реакцией с хлорным железом [114, 787] или биоавтографическим методом [ПО, 111], в качестве тест-микроба использовали andida pseudotropi alis. Опубликовано несколько сбор- [c.161]

Антибиотик (/-13.933. Для обнаружения на хроматограммах использовали биоавтографический метод с культурой клеток КВ. Антибиотик хроматографировали в системах Де Бэра — Гуксемы, во всех случаях величина Кг составляла 0,8—0,9 [41]. [c.165]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология