Разрушение клеток

Первая фаза биотрансформации отличается реакциями окисления, восстановления и гидролиза. Наиболее распространенные реакции -реакции окисления. При разрушении клеток мембраны эндоплазматического ретикулума с иммобилизованными на них ферментами биотрансформации образуют микросомы (шарообразные структуры). В связи с этим окислительная биотрансформация ксенобиотиков носит название микросомальное окисление. [c.399]

Перед экстракцией ферментов исходное сырье подвергают измельчению с целью разрушения клеток. Для этого применяют лабораторные и промышленные мельницы (вальцы, дезинтеграторы, дисмембраторы), а также высокое давление, ультразвук, чередующиеся замораживание и оттаивание. [c.168]

Полагают, что гибель бактерий обусловлена механическим разрушением клеток под влиянием условий, создаваемых ультразвуком. Нарушение жизненных функций клетки вызывается главным образом распадом белкового вещества протоплазмы. [c.166]

ИСТОЧНИКИ энергии (органические вещества) 4 — микроорганизмы 5 — акцепторы водо-ода (О2. 304. N02, N03) 6 — энергия (тепловая) 7 — энергия АТФ 5 —дыхание (окисле-не) 9 — клеточная масса —осаждение клеток // — разрушение клеток /2—продукты [c.11]

Из растений крахмал извлекают путем разрушения клеток и отмывания водой. В промышленном масштабе его получают главным образом из клубней картофеля (в виде картофельной муки), а также из кукурузы. [c.401]

Микросомы (термин, часто встречающийся в биохимической литературе) — это мелкие частицы диаметром 50—150 нм, которые представляют собой фрагменты в основном ЭР и частично плазматической мембраны. Микросомы образуются в процессе растирания или гомогенизации клеток. При центрифугировании разрушенных клеток сначала оседают ядра и другие крупные фрагменты, затем — митохондрии. При очень высоких скоростях (например, при 100 000 ) оседают микросомы (их масса составляет 10 —10 дальтон). На электронных микрофотографиях видно, что в микросомах фрагменты мембран замыкаются с образованием небольших мешочков, на наружной поверхности которых сохраняются рибосомы [c.33]

В действительности в интактных тканях фермент связан с мембранными фракциями, аналогичными лизосомам или вакуолям [37]. Только после разрушения клеток фермент и субстраты оказываются друг против друга. Так, достаточно измельчения клубня картофеля при температуре окружающей среды, чтобы вызвать гидролиз практически всех липидов мембран. [c.292]

Для разрушения клеток биомассу вначале промывают деци-молярным раствором сахарозы (pH 7,3), содержащим какой-либо буфер, этилендиаминтетрауксусную кислоту и альбумин. Затем добавляют стеклянные микрошарики и гомогенизируют в дезинтеграторе 1—2 мин при 13000 об/мин. Клеточные стенки и стеклянные микрошарики отделяют центрифугированием. [c.202]

Для разрушения клеток используют разнообразные химические, биологические и физические методы. Все процедуры должны быть достаточно жесткими, чтобы разрушить клеточную стенку, и в тоже время достаточно мягкими, чтобы исключить денатурацию белка. А поскольку клеточные стенки у разных микроорганизмов состоят из разных полимеров, никакого универсального метода их разрушения не существует. [c.365]

Химические методы разрушения клеточных стенок включают обработку щелочью, органическими растворителями или детергентами. Если белковый продукт не разрушается при pH от 10,5 до 12,5, то можно без труда и дешево ли-зировать большие количества бактериальных клеток. Например, рекомбинантный гормон роста человека очень просто выделить из клеток Е. соИ обработкой гидроксидом натрия при pH И. После обработки щелочью не остается практически ни одной жизнеспособной клетки, что автоматически решает проблему утечки рекомбинантных микроорганизмов. Обработка органическими растворителями - это простой и недорогой способ разрушения клеток, который используется для выделения ферментов из дрожжей. Однако, чтобы убедиться в том, что в подобранных условиях белковый продукт не денатурирует, необходимо провести предварительное тестирование. Под действием детергентов в мембранах бактериальных клеток образуются поры, через которые белки и другие молекулы выходят из клетки. К сожалению, детергенты дороги, в больщинстве случаев в их присутствии белки денатурируют, а кроме того, они могут загрязнять конечный продукт. [c.365]

После разрушения клеток их осколки удаляют либо низкоскоростным центрифугированием больших объемов, либо микрофильтрацией через мембрану. Белковый продукт осаждают из грубого или осветленного лизата органическими растворителями (спиртом или ацетоном) или сульфатом аммония. Достигаемое при этом обо-гашение — 2—5 раз. К сожалению, дороговизна [c.366]

Каковы преимущества и недостатки механического разрушения клеток по сравнению с химическим [c.370]

В-третьих, многие компоненты обладают очень низкой устойчивостью. Часто задача состоит в том, чтобы выделить тот или иной биополимер в нативном, т.е. сохраняющем биологическую активность, состоянии. Между тем многие белки и высокополимерные нуклеиновые кислоты при умеренных температурах и незначительных изменениях pH среды подвержены необратимому изменению конформации — денатурации, которая обычно сопровождается потерей биологической активности — инактивацией. Кроме того, в клетках часто находятся ферменты, способные разрушать те или иные вещества. В первую очередь это относится к белкам и нуклеиновым кислотам, так как клетки обычно содержат ферменты, способные катализировать гидролиз этих биополимеров, — протеазы и нуклеазы. В неповрежденных клетках эти ферменты преимущественно сосредоточены в специальных гранулах — лизосомах. Однако при разрушении клеток или тканей, которое всегда предшествует началу работ по выделению интересующих исследователя веществ, лизосомы обычно разрушаются, ферменты выходят наружу, что приводит к быстрому разрушению биополимеров уже в исходной биомассе. [c.231]

Для изучения структуры, состава и функций органелл их изолируют из клетки дифференциальным центрифугированием после разрушения клеток в гомогенизаторах (табл. 2.4). [c.40]

В конечном счете действие комплемента приводит к разрушению клеток путем их лизиса и к активации лейкоцитов, поглощающих чужеродные клетки в результате фагоцитоза. Комплемент индуцирует также освобождение хемотаксиче-ских факторов, которые обеспечивают перемещение полиморфноядерных лейкоцитов в соответствующую зону (гл. 1, разд. Д-2). Внимание биохимиков было сконцентрировано на распознающем компоненте комплемента С1, который состоит из 3 белков, обозначаемых lq, С1г и ls. Белок lq взаимодействует с Сн2-до.меном антител, связавших антигены. Однако (дополнение 5-Е) для активации lq необходим по крайней мере димер IgG или самопроизвольно образующийся пентамер IgM. Структура фактора lq (его мол вес равен 400 ООО) довольно необычна. К центральной части молекулы, диаметр которой составляет 3—6 нм, а длина— 10—12 нм, присоединены шесть очень тонких соединительных нитей длиной 10—13 нм и диаметром около 1,5 нм, заканчивающихся глобулами, имеющими диаметр нм. [c.387]

Для разрушения клеток в материале используют трехкратное замораживание с последующим оттаиванием или растирание материала в гомогенизаторе со стерильным песком или стеклянными бусами. [c.264]

Рекомендуется применять гистохимические методы исследования ферментов в тканях и клетках в сочетании с биохимическими определениями активности тех же ферментов в сыворотке крови. Угнетение первых в сочетании с повышением активности вторых может свидетельствовать о начавшемся процессе разрушения клеток. Некоторые авторы рекомендуют гистохимические исследования для прямого обоснования ПДК, что представляется не всегда убедительным без дополнительных функциональных исследований. [c.140]

В процессе выделения хромосом из клеток на стадии митоза эксперименты проводят при пониженных температурах (-Ь4°С), используя пластиковые пипетки во избежание деструкции хромосом Перед механическим разрушением клеток их суспендируют (10 клеток/мл) в гипотоническом растворе, а затем центрифугируют при 2500 д на холоду (примерно 25 мин при 4°С) Выход хромосом составляет около 10% от всех хромосом клеток-доноров Очищенные хромосомы должны быть использованы в опытах по переносу в реципиентные клетки (трансфекция) немедленно [c.185]

Ход работы. 1. Для разрушения клеток 2 г измельченной ножницами мышечной ткани помещают в ступку добавляют 2 мл 5%-ного раствора хлорида калия и растирают СО стеклянным песком до гомогенного состояния. Продолжая экстракцию белков, добавляют еще 3 мл раствора хлорида калия и растирают кашицу в течение 5 мин, затем еще раз добавляют 5 мл 5%-ного раствора хлорида калия и растирают 5 мин. [c.6]

Надосадочная жидкость после разрушения клеток ультразвуком [c.16]

Каждая живая клетка имеет оболочку или поверхностный слой протоплазмы, обладающие свойством полупроницаемостн. Так, оболочка эритроцитов непроницаема для ряда катионов (например, для К+ и N3+), хотя она свободно пропускает анионы и воду. Помещая животные или растительные клетки в дистиллированную воду, можно наблюдать перемещение воды внутрь клеток, что ведет к их набуханию, а затем к разрыву оболочек и вытеканию клеточного содержимого. Если в таком опыте использовать эритроциты, то вода окрасится гемоглобином в красный цвет. Подобное разрушение клеток путем разрыва их оболочек (или поверхностных слоев протоплазмы) называют лизисом, а в случае эритроцитов — гемолизом. [c.40]

Т. к. раств. в воде, для выделения из клеточной стенки их обычно Экстрагируют 10%-ной трихлоруксусной к-той при 2-4 °С в течение 24 ч с послед, осаждением этанолом или ацетоном. Более продолжит, экстракция может приводить к частичному гидролизу фосфодиэфирных связей или потере О-ацильных заместителей. Иногда Т.к. экстрагируют водным р-ром NaOH или диметилгидраэином, но в этих условиях более вероятна частичная деструкция полимера. Ли-по-Т. к. выделяют обработкой разрушенных клеток водным фенолом. Дальнейшую очистку Т.к. проводят методами гель-хроматографии, ионообменной хроматографии, высоковольтного электрофореза на бумаге и аффшшой хроматографии на лектинах. [c.510]

Патричелли с соавторами [88] вывели эмпирическое уравнение для явлений, происходящих при обезжиривании ядер семян подсолнечника. Разработанная ими модель учитывает основные параметры, какими являются размер частиц, интенсивность уплощения и температура экстрагирования. Эти исследователи пришли к заключению о том, что происходят два явления. Одно из них, быстропротекающее, связано с извлечением большей части жировых глобул, появляющихся в результате предшествующего разрушения клеток. Другое, значительно медленнее протекающее явление — это диффузия масла из ненарушенных, интактных клеток семян. Если в первом случае процесс просачивания растворителя результативен, то во втором приемлемо лишь погружение в растворитель. Поскольку просачивание практически неприменимо для очищенных семян подсолнечника, эти авторы разработали процесс обезжиривания методом погружения, который до настоящего времени не нашел широкого распространения [172]. [c.385]

Проферменты. Протеолитические ферменты пищеварительного тракта, а также поджелудочной железы синтезируются в неактивной форме—в виде проферментов (зимогенов). Регуляция в этих случаях сводится к превращению проферментов в активные ферменты под влиянием специфических агентов или других ферментов—протеиназ. Так, трипсин в поджелудочной железе синтезируется в форме неактивного трипсиногена. Поступив в кишечник, он превращается в активный трипсин в результате аутокатализа или под действием других протеиназ (механизм активации подробно рассматривается в главе 12). Превращение неактивного пепсиногена в активный пепсин происходит аутокаталитически в результате специфического ограниченного протеолиза в присутствии соляной кислоты и также связано с отщеплением от профермента специфического ингибитора пептидной природы. Эти превращения зимогенов в активные ферменты связаны с конформационными изменениями молекулы фермента и формированием активного центра или его раскрытием (демаскирование). Синтез протеиназ в неактивной форме и ряда других неактивных белков-пред-шественников имеет, очевидно, определенный биологический смысл, предотвращая разрушение клеток органов, в которых образуются проферменты. Примерами подобного активирования белков является активиро- [c.153]

Основным биологическим методом разрушения клеток микроорганизмов является лизис с помощью ферментов. Так, лизоцим яичного белка легко гидролизует клеточные стенки грамположительных бактерий. Для разрушения клеточных стенок грамотрицательных бактерий используют лизоцим и этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА), а клеточные стенки дрожжей гидролизуют с помощью одного или [c.365]

Для разрушения большого количества клеток обычно используют шаровые мельницы. Концентрированную клеточную суспензию заливают в камеру высокоскоростной шаровой мельницы, заполненную инертным абразивным материалом (например, стеклянными шариками диаметром <1 мм). Содержимое быстро перемешивают с помошью лопастей, насаженных на ось. Большинство клеток разрушается под действием сдвиговых напряжений, возни-каюших в результате быстрого движения шариков. Условия оптимального разрушения клеток можно подобрать, варьируя число и форму лопастей, скорость перемешивания, размер шариков, их число, концентрацию клеток, геометрию камеры и температуру. Приборы такого типа успешно использовались для разрушения клеток самых разных микроорганизмов. С их помошью можно легко разрушать клетки как нерекомбинантных, так и рекомбинантных микроорганизмов. [c.366]

Еше один механический метод разрушения клеток — соударение. Клеточную суспензию большой вязкости направляют под давлением на неподвижную поверхность или навстречу потоку другой суспензии. В месте соприкосновения выделяется большое количество энергии, разрушающей клетки. Таким способом с помощью устройства под названием Mi roflmdizer за один прием была разрушена большая часть клеток Е. соИ в двух встречных потоках суспензии. Однако для разрушения клеток других микроорганизмов может понадобиться большее число раундов. В отличие от гомогенизаторов под высоким давлением и высокоскоростных шаровых мельниц, в которых, как правило, используются концентрированные клеточные суспензии, данное устройство пригодно для обработки любых суспензий. Как показали предварительные исследования, активность клеточных белков уменьшается при разрушении клеток по этой методике лишь незначительно, А если обработать суспензию клеток небольшим количеством лизоцима, а затем использовать устройство Mi rofluidizer в режиме пониженного по сравнению с обычным давления и при небольшой вязкости, то сохранится активность некоторых лабильных белков, инактивирующихся при высоком давлении. [c.366]

Для знакомства с формами разных видов клубеньковых бактерий готовят фиксированные и окрашенные препараты из бактероидной ткани клеток клубенька. Если клубенек достаточно крупный, его разрезают бритвой на две части и поверхность среза многократно прокалывают стерильной иглой, вызывая возможно большее механическое разрушение клеток клубенька. Из механически поврежденной части клубенька отжимают каллю на предметное стекло и готовят фиксированный и окрашенный препарат. [c.124]

При разрушении клеток С. pasteurianum гидрогеназная активность проявляется только в растворимой фракции в периплазматическом пространстве и цитоплазме. Гидрогеназа, локализованная в периплазматическом пространстве, катализирует необратимую реакцию поглощения Нз- Находящаяся в цитоплазме гидрогеназа способна катализировать реакции как поглощения, так и вьщеления Н3. У клостридиев она входит в состав ферментного комплекса, осуществляющего окислительное декарбоксилирование пирувата (см. рис. 57). [c.237]

С точки зрения биологического действия ранункулин — относительно инертное соединение. Однако в случае механического повреждения растения из разрушенных клеток его выходят ферменты, гидролизующие гликозиды (гликозидазы). Под их действием из гликозида 1.190 освобождается [c.57]

Микроскопия. Наиболее информативный метод диагностики висцерального лейшманиоза — микроскопия мазков костного мозга, пунктата лимфатических узлов и селезенки, окрашенных по Романовскому— Гимзе. Амастиготы локализуются в цитоплазме гистиофагоцитарных клеток (кожи, слизистой оболочки, внутренних органов и др.). В процессе приготовления мазков из-за повреждения этих клеток лейшмании освобождаются и располагаются внеклеточно или в обрывках цитоплазмы разрушенных клеток. [c.361]

По сравнению с известными способами механического и ферментативного разрушения клеток, способ автолиза является самым перспективным, так как не требует сложной аппаратуры и дорогостоя-ш их ферментных препаратов для обработки микробной биомассы. [c.88]

Недавно показана противоопухолевая активность арабиногалактана лиственницы западной [70]. Он ингибирует рост и способствует разрушению клеток некоторых видов злокачественных опухолей [71-73]. Считается, что в основе антиметастазной активности арабиногалактана лежит процесс рецепторного промежуточного эндоцитоза, имеющего место при взаимодействии асиалогликопро-теинового рецептора печени с углеводным звеном арабиногалактана. Блокируя рецепторы печени, арабиногалактан препятствует агрегации клеток опухоли. Предполагается, что с асиалогликопро-теиновыми рецепторами из углеводов взаимодействует только D-галактоза, причем, в химическом связывании с рецептором важную роль играет 4-ОН группа галактозы [74]. [c.339]

В каждом опыте рассчитывали баланс масс. Определяли содержание растворенных и нерастворимых органических соединений металлов и нерастворимых соединений, входящих в состав биомассы. Эта последняя фракция далее была разделена на металл внутри- и внеклеточный. Разделение осадка на фракции осуществляли с помощью просеивания, декантации, фильтрации и промывки в азотной кислоте и ЭДТА. Таким способом удается количественно отделить клеточную биомассу от осадка. Все определения металлов проведены методом атомно-адсорбционной спектрометрии. Подробная схема разделения описана в [19]. Было найдено, что металлы всегда распределяются между неорганической фазой и биомассой. Промывание клеточной биомассы раствором ЭДТА способствует выделению некоторого количества металлов, но полное извлечение происходит лишь после разрушения клеток. [c.292]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология