ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Силикагель из "Хроматография белков и нуклеиновых кислот" Последнее оказалось необходимым из-за того, что сефакрилы S-500 и S-1000, предназначенные для фракционирования нуклеиновых кислот и полисахаридов, пмеют столь крупные поры, что прокалибровать их по молекулярным массам белков не представляется возможным. [c.118] На рис. 61 представлены графики селективности сефакрилов для двух вариантов фракционирования белков нативных (глобулярных) и денатурированных, имеющих форму статистических клубков (в 6 М растворе гуанидинхлорида). Как и в случае сефадексов, линейные участки графиков лежат в более узком интервале молекулярных масс, чем вся область фракционирования. Кроме того, весьма существенно отличаются друг от друга графики для нативных и денатурированных белков. Например, легко видеть, что нативный белок с М = 100 ОООна сефакриле S-400 должен иметь K v = 0,75, а в денатурированном виде на том же S-400 он будет двигаться в соответствии с Kav = 0,42, т. е. значительно быстрее. Этого и следовало ожидать из-за различия в плотности упаковки нативных и денатурированных белков. [c.118] Как видно из нриведеппых данных, процентное содержание агарозы в гелях отражено в маркировке этих матриц. Диаметры здесь даны для набухших гранул. На рис. 62 представлены графики селективности матриц сефарозы. [c.119] В отличпе от сефадексов и обычной сефарозы, пористость сшитой сефарозы практически не лсеняется при переходе от водных растворителей к органическим. При этом она устойчива к пх воздействию, что облегчает проведение разнообразных химических реакций замещения с целью получения аффинных сорбентов. Вместе с тем отметим, что активация сефарозы L бромистым цианом (для присоединения аффинных лигандов) происходит с вдвое более низкой эффективностью, чем в случае обычной сефарозы. Это объясняется тем, что сшивка идет по тем же самым гидроксилам, что и активация с помощью Br N. [c.120] Биогели серии А. Американская фирма Bio-Rad выпускает агарозные матрицы для гель-фильтрации под торговым наименованием Bio-Gel А . Нет нужды останавливаться на свойствах этих матриц — они аналогичны тем, что были описаны для сефарозы. Ниже представлены параметры шести тппов этих матриц. [c.120] Здесь уместно заметить, что определение среднего размера пор — дело трудное его результаты зависят от природы матрицы и потому ненадежны. Убедительной корреляции между областью фракционирования биополиыеров и размером пор установить не удается. По этой причине большинство фирм среди параметров матриц для гель-фильтрации размеров пор не указывают, а ограничиваются областью фракционирования. В каталоге фирмы Serva (1983 г.) приведен график взаимозависимости этих величин для матриц на основе силикагеля (рис. 67). Его следует рассматривать как сугубо ориентировочный. [c.126] Для гель-фильтрации при высоком давлении используются уже готовые фирменные колонки. Их подготовка ограничивается заменой элюента, если это необходимо. Колонки низкого давления, как правило, заполняются в лаборатории. Готовые пластиковые колонки для обессоливания, наполненные сефадексом G-25 Medium Vf = 9.1 Л1л), предлагает фирма Pharma ia под маркой PD-10. [c.126] Вернуться к основной статье