ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Метод ПЦР и новая эра в исследовании ДНК из "Новая старая ДНК Уникальные черты самой главной молекулы или почему ученые разных специальностей в последнее время обращают на ДНК все больше внимания" Начиная с третьего цикла, происходит экспоненциальная амплификация именно целевых фрагментов ДНК, ограниченных с обеих сторон праймерами. В то же время с каждым новым циклом в цепную реакцию вовлекаются вновь синтезированные по гетерогенным матрицам целевые ампликоны, накопление которых уже затем происходит также экспоненциально. Так, например, после 25 циклов количество подобных ампликонов превысит исходное количество молекул ДНК более чем в миллион раз. При этом одновременно в арифметической прогрессии увеличится и число гетерогенных матриц, комплементарных цепям исходного фрагмента ДНК, однако, таковые будут составлять ничтожную часть, которой, как правило, просто пренебрегают. Впрочем, процесс накопления продуктов в ходе ПЦР достаточно сложен, подчиняется своим внутренним законам и не совсем строго соответствует теоретически ожидаемому количеству амплифицированных фрагментов ДНК. [c.19] Открытие возможности избирательной амплификации определенных участков ДНК с помощью ПЦР произвело по существу революционный переворот в умах и взглядах исследователей. Значительный пересмотр претерпели подходы к секвенированию ДНК, которое теперь взяли на вооружение, например и геносистематики (ботаники, зоологи), использующие его для выяснения вопросов филогении и эволюции. До появления метода ПЦР можно было секвенировать только рекомбинантные молекулы ДНК и в связи с достаточной сложностью методов клонирования, получение таких рекомбинантных ДНК и их последующее секвенирование было доступно лишь молекулярно-биологическим лабораториям. Амплификация же определенных фрагментов ДНК с помощью специфических праймеров и ДНК полимеразы, приводящая за короткий промежуток времени к наработке значительных количеств нужных участков ДНК, явилась мощной и доступной альтернативой методу клонирования. Таким образом, многие лаборатории, ранее и не помышлявшие о секвенировании ДНК ввиду сложности подготовительных этапов, стали активно использовать этот метод в своих исследованиях. Что касается тех, кто и так раньше владел методами секвенирования ДНК, то они также взяли на вооружение метод ПЦР-секвенирования и занялись разработкой его различных модификаций. [c.20] Вернуться к основной статье