ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Электрофорез в ПААГ нативного белка в градиенте ПОРИСТОСТИ геля из "Методы изучения митохондрий растений Полярография и электрофорез" Верхним электродным буфером служит трис-глицин, pH 8,3 (0,025 М Трис и 0,192 М глицин). Нижний электродный буфер имеет такой же состав. Рабочий гель полимеризуют в 0,375 М Трис-НС1 буфере, pH 8,8, а формирующий гель в 0,0625 М Трис-НС1 буфере, pH 6,8. Анализируемые белки растворяют в буфере, который содержит Трис-НС1 (0,0625 М, pH 6,8), 2-меркаптоэтанол 5%, глицерин 10%, бромфеноловый синий 0,001%). Электрофорез проводят, выравнивая объем наносимого белкового препарата по количеству наносимого белка, не допуская в то же время перегрузки по белку, т.е. не более 25-30 мкг белка на трек. [c.59] Разделяющий гель содержит градиент концентрации от 4.5 до 20 % полиакриламида. Этот градиент создают с помощью трех каналов перистальтического насоса Р-3 (РЬаппас1а, Швеция). Для того чтобы полимеризация проходила равномерно, полимеризующиеся блоки охлаждают. Для создания ровной верхней границы разделяющего геля на него наслаивают изобутанол, насыщенный водой. Электрофорез проводят в охлаждаемой камере. Стеклянные блоки прижимают специальными зажимами к передней части катодного отсека так, чтобы меньшая пластина была на уровне выреза в передней стенке прибора, а большая пластина бьша выше этого выреза. Носле заливки сочленений 1,5%о агарозой в электродный резервуар наливают верхний электродный буфер. Пластины опускают в нижний электродный буфер. Для того чтобы между прокладками и пластинами не протекал электрический ток, эти стыки проливают расплавленным парафином. Охлаждение гелевых блоков осуществляют, пропуская холодную воду через трубчатый холодильник, встроенный в анодную часть. Этот холодильник охлаждает нижний электродный буфер, в который были опущены стеклянные блоки. [c.59] Вернуться к основной статье