ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Гибридизация нуклеиновых кислот из "Биологическая химия" Вторичная структура нуклеиновых кислот образуется за счет возникновения водородных и гидрофобных связей между основаниями, т. е. слабых взаимодействий. [c.110] Поэтому, как и в случае белков, возможна денатурация нуклеиновых кислот при умеренных воздействиях. [c.111] Денатурация ДНК происходит при нагревании раствора до 70-100 °С, а также в сильнокислой или щелочной средах, или в растворе мочевины. В результате разрушения водородных и гидрофобных связей цепи расходятся и принимают конформацию беспорядочного клубка. Температура денатурации зависит от состава ДНК чем больше в ДНК нуклеотидных пар ГЦ, тем выше температура денатурации. [c.111] Денатурация данного образца ДНК происходит в довольно узком интервале температур, поэтому ее часто называют плавлением. Денатурация сопровождается увеличением поглощения при 260 нм (т. н. гиперхромный эффект). Поглощение может увеличиться примерно в 1,5 раза. Это дает удобный метод наблюдения за ходом денатурации (см. рис. 3.14). Денатурацию можно обнаружить также по уменьшению вязкости раствора. [c.112] Относительное поглощение — это отношение поглощения УФ-излучения раствором ДНК при комнатной температуре к поглощению при температурах, указанных на графике. [c.112] Если ДНК человека разрезать с помощью рестриктаз на фрагменты длиной 4000 нуклеотидов, то получится около 1 млн фрагментов. Как в такой груде найти и извлечь из нее искомый фрагмент Это можно сделать, используя ДНК-зонды. Зонды представляют собой фрагменты одноцепочечной ДНК длиной около 20 нуклеотидов, содержащие радиоактивную (например, Р) или другую метку. Нуклеотидная последовательность зонда должна быть комплементарна какой-то части искомого фрагмента ДНК. Зонд вносят в раствор фрагментов ДНК, смесь нагревают для денатурации ДНК, затем охлаждают для ренативации ДНК. При этом часть искомых фрагментов соединится с зондом, таким образом искомый ген окажется меченым (рис. 3.16). Затем смесь разделяют электрофорезом и по наличию радиоактивной метки находят нужный фрагмент. РНК тоже можно использовать в качестве зонда. [c.113] Вернуться к основной статье