ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Регулируемая экспрессия целевых генов из "Генетическая инженерия" При изучении фзшкции генов в таком сложном генетическом окружении, которое характерно для клеток млекопитающих, может возникать потребность в регулируемом включении-выключении конкретного гена. Поэтому в разных лабораториях предпринимались попытки контролировать активность вводимых в клетки млекопитающих трансгенов, используя индуцируемые эукариотические промоторы. Первыми были испытаны промоторы, индуцируемые катионами тяжелых металлов, гормонами или тепловым шоком. Основным недостатком этих систем было то, что индукция приводила к плеотропным эффектам, так как активировались не только трансгены, но и ряд собственных генов клеток. [c.349] Использование индуцируемой системы ре-прессор-оператор лактозного оперона Е. соИ в клетках млекопитающих, несмотря на быстрое погаощение и внутриклеточную стабильность ИПТГ, оказалось ограниченным из-за медленного и неэффективного действия индуктора, вызывающего только умеренную активацию транскрипции целевых генов. [c.351] Благодаря простоте, эффективности, универсальности и нетоксичности разработанные системы регулирования экспрессии трансгенов стали в дальнейшем использовать не только в культурах клеток, но и в трансгенных животных и растениях. [c.352] Щелкунов С. Н. Клонирование генов. Новосибирск Н ка, 1986. 228 с. [c.352] Известна полная последовательность 5243 пн ДНК вируса 8У40. Имеется подробная информация о внутриклеточной организации и репликации генома данного вируса, составлена детальная физическая карта ДНК, на которой локализованы области генома, ответственные за различные вирусные функции, изучена регуляция экспрессии врфусного генома в различных клетках млекопитающих. [c.354] Ранний промотор вируса 8У40 устроен относительно сложно. Он содержит характерный для эукариотических промоторов ТАТА-бокс (блок Хогнесса) на расстоянии 30 пн от точки инициации транскрипции (см. 4.1). Дополнительные элементы промотора расположены на расстоянии 115 пн от точки инициации и представляют собой три прямых повтора последовательности длиной 21 пн (рис. 14.2). С этой областью связывается клеточный фактор 8Р1. Затем 8Р1 взаимодействует с другими белками, в результате чего формируется комплекс, необходимый для эффективной транскрипции РНК-полимеразой II. [c.354] Т-антиген осуществляет авторегуляцию экспрессии своего гена. При повышенной концентрации в клетке он связьшается с участками 3 и Г (см. рис. 14.2) на ДНК SV40 и подавляет раннюю транскрипцию. [c.355] Участок ori является единственным районом генома SV40, который необходим в цис-ио-ложении для репликации вирусной ДНК. Остальные генетические элементы вируса могут находиться в /иранс-положении, т. е. любые мутанты вируса SV40 с неповрежденным репликатором могут образовывать потомство в присутствии в клетке вируса-помощника. [c.357] Важная особенность усилителей состоит в том, что они могут активировать транскрипцию с промоторов, расположенных на расстоянии от нескольких сотен пар нуклеотидов до 10 тпн. При этом эффект усилителя не зависит от его ориентации относительно промотора. Другим свойством усилителей, имеющим большое значение для генетической инженерии эукариот, является то, что эти элементы могут увеличивать эффективность транскрипции при подстройке их как к гомологичным, так и к ге-терологичным промоторам. [c.357] Вернуться к основной статье