ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Клонирующие векторы на основе плазмид стафилококков и стрептококков из "Генетическая инженерия" На образовавшейся одноцепочечной кольцевой ДНК имеется сегмент pal с палиндром-ной последовательностью, способной формировать шпилечную структуру. На этой шпильке инициируется ориентированный синтез комплементарной цепи ДНК. Механизм синтеза пока не ясен, но полагают, что он аналогичен изученному для мелких фагов Е. соН типа 0X174, у которых на шпильке образуется РНК-затравка и с ней взаимодействуют ферменты, обеспечивающие синтез комплементарной цепи ДНК. В сбалансированной системе эффективной репликации плазмид по рассмотренному механизму одноцепочечная форма составляет лишь 3-5 % суммарной плазмидной ДНК. Если же взаимодействие ферментов и ДНК по той или иной причине нарушено (мутации в плазмиде или гетерологичные клеточные ферменты), содержание одноцепочечной формы может значительно увеличиться, что приводит к снижению копийности плазмиды и нестабильности ее сохранения в бактериальной культуре. [c.242] Рассмотренные плазмиды — векторы с негативной селекцией, так как гибридные молекулы ДНК выявляются по инактивации определенных генов устойчивости к антибиотикам. Первоначально на агаризованной селективной среде с определенным антибиотиком отбирают клоны клеток, содержащих или гибридные, или исходную плазмиды, а лишь затем перепечаткой на среду с антибиотиком, ген устойчивости к которому в гибридных плазмидах должен быть нарушен, выявляют клоны гибридов. [c.243] В процессе развития культуры В. subtilis и образования спор. Этот подход, по-видимому, очень перспективен для исследования тонких механизмов такого сложного процесса дифференци-ровки, каким является споруляция бацилл. [c.246] В настоящее время имеется достаточный набор векторных молекул для проведения широкого спектра генно-инженерных экспериментов в клетках бацилл. Недостаток этих векторов состоит в том, что они не способны в мономерной форме трансформировать компетентные клетки В. subtilis. Качественно новые векторы для бацилл удалось создать на основе некоторых плазмид грамположительных бактерий рода Strepto o us. [c.246] Вернуться к основной статье