ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Конструирование искусственных генов из сверхдлинных полинуклеотидов из "Генетическая инженерия" Последовательность искусственного гена разбивается на полинуклеотиды длиной 80-90 нуклеотидных звеньев. Они дополняются с 5 -и 3 -концов 18-членными последовательностями, комплементарными участкам векторной плазмиды, окружающим уникальный сайт рестрикции (например Bsml). Векторная плазмида линеаризуется по этому сайту и отжигается с полинуклеотидом. Полученной смесью трансформируют компетентные клетки Е. соИ. Комплементарная синтетическому полинуклеотиду цепь синтезируется in vivo хозяйской ДНК-полимеразой Е. oli. [c.74] ДЛЯ того чтобы ОН регенерировался в векторе на каждой стадии. После клонирования первого полинуклеотида (рис. 1.57) точно таким же образом клонируют второй и т. д. до получения целевой структуры. Этим методом был сконструирован ген анафилатоксина СЗа человека. [c.75] Вернуться к основной статье