ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Радиоизотопы и мембранные фильтры из "Мембранная фильтрация" Следует заметить, что все эти устройства первоначально были предназначены для ультрафильтрации, которая проводится с большими объемами жидкости и при высоком давлении. Замена ультрафильтров на микрофильтрационные мембраны приводит к необходимости использовать более низкие давления, чтобы не повредить как саму мембрану, так и концентрируемые клетки. Фирма ADAPS, In . продает автоматические ячейки для работы с малыми объемами клеток и супернатантов главным образом для биомедицинских исследований. [c.313] Улавливание радиоактивности с помощью мембран. Один из наиболее щироко применяемых методов — это измерение радиоактивности, поглощаемой бактериями или другими микроорганизмами, которые инкубировались в присутствии какого-либо растворенного радиоактивного вещества. После того как инкубация закончена, образец пропускают через мембрану, которая отделяет ставшие радиоактивными клетки от непоглощенной радиоактивности. Обычно пользуются мембранами из эфира целлюлозы с размером пор 0,45 мкм, хотя при желании можно использовать мембраны с большими и меньшими порами. Если растворенное радиоактивное вещество удаляется с трудом или если желательно прибегнуть к процессу просеивания (см. разд. 11.5), то можно использовать трековые мембраны Нуклепор. Как правило, при исследованиях, связанных с поглощением радиоактивности, основная часть последней остается в растворе, так что задача состоит в отделении незначительного количества радиоактивности частиц от высокой радиоактивности раствора. Подчеркнем исключительную важность того, чтобы это отделение было полным и чтобы на мембране не оставалось даже следов растворенных радиоактивных веществ, так как в противном случае неизбежна грубая ошибка в результатах. Обычная процедура после фильтрации заключается в том, чтобы промыть мембрану нерадиоактивной жидкостью с целью полного удаления радиоактивного раствора из мембраны. Эффективность промывки следует проверить с помощью соответствующего отрицательного контроля (например, поглощения, измеренного в присутствии клеточного ингибитора), а также провести контрольный опыт, когда раствор радиоактивного вещества пропускается через мембрану без какой-либо предварительной инкубации с образцом. Совершенно необходимо удостовериться в том, что в отсутствии клеток на мембране совсем не остается радиоактивности в противном случае следует использовать мембрану другого типа. Кроме того, возможно загрязнение самих радиоактивных растворов микроорганизмами последние при этом могут приобретать некоторую радиоактивность и вносить погрешность в измерения. Стерильность растворов должна поддерживаться в любом случае, и, прежде чем использовать радиоактивные растворы, их необходимо обязательно профильтровать. [c.314] Одна важная особенность, которую надо иметь в виду, заключается в возможной адсорбции радиоизотопа мембраной. [c.314] Идеальный мембранный фильтр должен представлять собой совершенно инертную структуру, которая задерживает частицы, но пропускает растворенные вещества, меньшие по размеру, чем поры. Однако такая идеальная мембрана никогда не была создана. В действительности мембранные фильтры адсорбируют растворенные вещества, и это может стать серьезной проблемой в случае фильтрации малых объемов. Почему именно малых Потому что матрица мембранного фильтра содержит многочисленные центры, на которых может адсорбироваться растворенное вещество, и насыщения этих центров при прохождении первой порции жидкости через мембрану еще не происходит. При этом любое растворенное в жидкости вещество, способное адсорбироваться на этих центрах, будет таким образом удалено из фильтрата. Если фильтруется большой объем жидкости, то такая адсорбция вряд ли вызовет осложнения, поскольку центры быстро насыщаются и общая концентрация вещества, растворенного в фильтрате, уменьшится незначительно. Другое дело — фильтрация малых объемов, когда, к примеру, подвергается стерилизации очень ценное вещество, находящееся в растворе в этом случае адсорбция может играть существенную роль. [c.315] Другая проблема, возникающая в случае фильтрации малых объемов,— это потери фильтруемой жидкости остающейся в матрице мембраны. Если мембрану нельзя промыть (так как это привело бы к разбавлению фильтрата), то значительная часть вещества, растворенного в малом фильтруемом объеме, будет потеряна. Некоторые типы мембран имеют большой объем пор и поэтому впитывают еще больше жидкости. Мембраны Нуклепор, однако, обладают много меньшим объемом пор и, следовательно, лучше всего подходят для фильтрации малых объемов веществ в тех случаях, когда стремятся получить именно фильтрат. [c.316] Комбинация образец — мембрана может быть либо полностью растворимой, и в этом случае речь идет о гомогенной системе, либо же образец может остаться нерастворенным, и тогда говорят о гетерогенной системе. [c.316] Гетерогенные системы для счета вполне удовлетворительны в случае и других источников р-излучения высокой энергии. [c.316] Необходимо лишь, чтобы мембрана была полностью увлажнена сцинтилляционной смесью. Положение мембраны в стаканчике для счета несущественно, но она должна быть полностью прозрачна. Однако следует заметить, что если мембрана не была высушена полностью перед помещением в сцинтилляционную жидкость, то вода в ней образует непрозрачную пленку, которая будет поглощать свет. Кроме того, образец может растворяться в этой жидкости, даже если мембрана не растворяется, и это может приводить к снижению эффективности счета в случае, когда растворенный образец вызывает химическое тушение или тушение красителями. [c.317] Гомогенные системы необходимы для счета р-излучения низкой энергии таких источников, как тритий. Самопоглощение образцом или мембраной может быть значительным, хотя в большинстве случаев образец причиняет, пожалуй, больше трудностей, чем мембрана. Оно будет представлять более значительную проблему при увеличении размера частиц осадка, при увеличении общей массы осадка или при неравномерном распределении осадка на мембране. Поскольку самопоглощение трудно определить количественно, трудно оценить и абсолютную эффективность счета. [c.317] Если необходимо провести счет образцов, вызывающих сильное тушение, или объемистых осадков с низкой радиоактивностью, предпочтительнее сжечь образец и превратить радиоактивный материал в СОг или НгО. Радиоактивный газ улавливается сцинтилляционной смесью, что дает гомогенную систему для счета. Фильтры из тефлона и стекловолокна не горят, поэтому, если сжигание необходимо, следует пользоваться фильтрами из эфиров целлюлозы. [c.318] Следует подчеркнуть, что для получения максимальной воспроизводимости счета в одной экспериментальной серии все образцы должны быть обработаны одинаково. [c.318] Вернуться к основной статье