ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы СТЕРИЛИЗАЦИЯ И ПРОЦЕСС МЕМБРАННОЙ ФИЛЬТРАСтерилизация мембранных фильтров из "Мембранная фильтрация" Главным требованием, которое предъявляется к стерилизующим мембранам, является удаление из фильтруемой жидкости всех жизнеспособных микроорганизмов. В большинстве случаев это требует применения мембран с номинальным размером пор 0,2 мкм. Однако существуют несколько типов бактерий, например определенные виды микоплазм, которые достаточно малы и настолько гибки, что проникают сквозь мембраны с размерами пор 0,2 мкм. Поэтому для их задержки требуются мембраны с размерами пор 0,1 мкм. Но, поскольку производительность таких мембран намного меньше, их применяют лишь в специальных случаях. [c.164] насколько хорошо стерилизующая фильтрация выполняет свои функции, зависит частично от метода испытаний на выживаемость бактерий. Фармакопея США, разрабатывающая руководства для фирм, производящих лекарственные препараты, предписывает для проведения испытаний на стерильность использовать несколько различных типов культуральных сред (см. разд. 7.12). Если живой микроорганизм, присутствующий в фильтрате, окажется неспособным к росту в одной из них, этот факт может не вызвать подозрений и жидкость будет ошибочно считаться стерильной. Не будет сильным преувеличением сказать, что стерильность — это не абсолютная характеристика, а лишь то, что можно установить при помощи анализов. [c.164] Связь точек пузырька со свойствами мембранных фильтров по задержке бактерий Исследования, выполненные Рети и др. (177], а также Сладеком и Лихи [197], позволили выработать некоторые общие принципы для решения вопроса о размерах пор мембран в стерилизующей фильтрации. Эти авторы сравнивали мембраны, имеющие различные диаметры пор, по их способности задерживать бактерии, которые определялись через значения точек пузырька. Задержка бактерий характеризовалась параметром, называемым логарифмическим показателем снижения ЛПС), который равен отношению десятичных логарифмов числа микроорганизмов в фильтруемой жидкости и числа микроорганизмов, прошедших сквозь мембрану. При использовании мембраны с размерами пор 0,2 мкм ЛПС достигает 10, т. е. максимального значения, которое может быть получено при проведении испытания с указанной мембраной. Значение ЛПС, равное 10, означает, например, что 10 ° бактерий остаются на мембране, а 10 бактерий проходит сквозь нее в фильтрат. Как видно из рис. 7.1, имеется прямая связь между размером пор мембран и ЛПС (эта зависимость была также подтверждена Джонстоном и Мельцером-[118]). [c.164] Устойчивость мембраны различного химического состава к действию тепловой и химической стерилизации оказывается существенно разной. Поэтому в каждом конкретном случае важно знать, какой из возможных способов стерилизации подходит лучше всего. При использовании мембран для анализа качества воды часто сталкиваются с тем, что в зависимости от способа стерилизации мембраны меняется и ее способность извлекать из воды микроорганизмы. Эту проблему мы рассмотрим в разд. 10.6. [c.166] Автоклавирование. Мембранные фильтры часто продаются в стерильных упаковках, но в большинстве случаев потребитель может простерилизовать мембраны самостоятельно. Многие мембранные фильтры можно автоклавировать при температуре 121 °С и давлении 1,5 атм в течение 15 мин. При этом каждую мембрану рекомендуется положить между двумя кусками фильтровальной бумаги, завернуть всю упаковку в бумагу и в таком виде поместить в автоклав. Некоторые фирмы продают так называемую упаковку для автоклавирования , в которой несте-рилизованные мембраны упаковываются таким образом, чтобы их можно было автоклавировать непосредственно (как правило, в упаковке содержится 10 мембран, переложенных адсорбирующими мягкими прокладками). Фирма Гелман компани продает мембраны в упаковках для автоклавирования, имеющих вид конвертов, у которых после автоклавирования меняется цвет краев, что указывает на завершение процесса. [c.166] Возможно также проведение автоклавирования мембраны уже после ее помещения в фильтродержатель. Если требуется осуществить небольшое число фильтраций, то мы рекомендуем осуществлять стерилизацию именно таким образом. Мембрану помещают в фильтродержатель и лишь слегка уплотняют ее в нем. Для защиты мембраны под нее кладут кусок фильтровальной бумаги. Затем фильтродержатель с мембраной заворачивают в бумагу и подвергают автоклавированию. Непосредственно перед употреблением мембрану тщательно уплотняют в фильтродержателе. Осуществлять стерилизацию мембран подобным образом рекомендуется в тех случаях, когда стерилизующую фильтрацию необходимо провести не в лаборатории, а, скажем, в полевых условиях. [c.166] НОСТЬ операции должна быть как можно короче. За информацией по автоклавированию различных мембран следует обращаться к технической документации соответствующих фирм-изготовителей. [c.167] В случае когда имеется предварительно стерилизованная мембрана, фильтродержатель желательно автоклавировать в несобранном виде, а затем собирать его в асептических условиях. Мембрану следует брать пинцетом, кончики которого были про-стерилизованы в пламени спиртовки. [c.167] Автоклавирование оказывает определенное влияние на свойства мембраны. Даубнер и Петер [57] показали, что мембраны из нитроцеллюлозы при этом деформируются несколько уменьшаются их толщина и диаметр, а также размеры пор, например с 0,28 до 0,25 мкм. Мембраны из ацетилцеллюлозы более устойчивы к автоклавированию, чем мембраны из нитроцеллюлозы или из смеси эфиров целлюлозы. Если нитроцеллюлозные мембраны следует стерилизовать при температурах, не превышающих 121 °С в течение не более 20—30 мин, то мембраны из ацетилцеллюлозы можно автоклавировать при температурах на 7—10 градусов выше в течение времени до 65 мин, причем в этих условиях каких-либо существенных изменений у них не наблюдается. Если в каких-то конкретных случаях нужно знать точно размеры пор мембран, то после автоклавирования в ответственных случаях необходимо выполнить специальные определения этих размеров. Мембраны из ацетилцеллюлозы, в отличие от нитроцеллюлозных, можно автоклавировать повторно. Если уже собранную фильтровальную установку подвергли автоклавированию, но не использовали сразу же для фильтрации, ее можно хранить в течение нескольких дней в асептических условиях, однако больше недели этого делать не рекомендуется. Повторному автоклавированию можно подвергнуть уже собранную установку с мембраной из ацетилцеллюлозы, но, если используется мембрана из нитроцеллюлозы, установку следует разобрать, поставить новую мембрану, после чего подвергнуть ее повторной стерилизации. [c.167] Сухожарная стерилизация. Для стерилизации мембран из ацетилцеллюлозы или тефлона (но не из нитроцеллюлозы или найлона) их можно подвергнуть горячей сушке при температуре 180 °С в течение двух часов. Можно также стерилизовать мембраны текучим паром при атмосферном давлении. Для того чтобы все споры погибли, рекомендуется последовательная пропарка мембраны в течение трех дней по 20 мин в день. [c.167] Другим химическим агентом, который можно применять для стерилизации, является формальдегид. Его используют для мембран, хранящихся во влажном состоянии (например, в случае регенерированной целлюлозы). Стерилизацию проводят, выдерживая мембрану в течение 24 ч в 2 %-ном растворе формальдегида с последующим удалением его из мембраны промывкой в течение некоторого времени стерильной водой. [c.168] Радиационная стерилизация. Мембраны можно также стерилизовать ультрафиолетовым светом. Это один из тех методов стерилизация, который практически не воздействует на мембрану и гарантирует ее абсолютную стерильность. Для достижения стерильности вполне достаточно облучения обеих сторон мембраны с помощью стандартной бактерицидной лампы ультрафиолетового света с расстояния 50 см в течение 20— 30 мин. При этом каких-либо изменений размеров пор или механических характеристик мембраны даже посредством весьма точных измерений установить не удается. [c.168] Вернуться к основной статье