ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Секвенирование ДНК посредством гибридизации из "Секвенирование ДНК" Продолжающийся поиск альтернативных возможностей определения нуклеотидной последовательности ДНК привел к разработке принципиально нового метода секвенирования ДНК посредством гибридизации. В его основу было положено представление, что вся последовательность ДНК состоит из коротких подпоследовательностей. Знание порядка нуклеотидов в них, а также расположение этих подпоследовательностей друг относительно друга позволяют реконструировать весь исследуемый фрагмент ДНК. Принцип определения нуклеотидной последовательности секвенируемого фрагмента ДНК этим методом основан на образовании Уотсон-Криковских пар в результате проведения этапа гибридизации фрагмента ДНК с набором олигонуклеотидных зондов. Анализ характера гибридизации конкретных олигонуклеотидов позволяет провести реконструкцию секвенируемого фрагмента ДНК. [c.400] Словом, потенциал секвенирования ДНК гибридизацией достаточно велик, что и объясняет повышенный интерес ряда фирм и ведущиеся споры вокруг патента на этот метод, о правах на который в 1988 г. заявил английский ученый Э. Саузерн [Bains, 1997 Butler, 1997]. [c.401] Как будет видно из дальнейшего изложения, в процессе продолжающейся разработки метода секвенирования ДНК посредством гибридизации предлагались различные варианты модификации олигонуклеотидов как иммобилизованных в матрице, так и образования на их основе за счет стэкинг-взаимодействий некоего гибридизационного комплекса с участием более коротких олигонуклеотидов, как несущих, так и не несущих метку. [c.404] Относительно недавно этой же группой авторов была предложена простая процедура, позволяющая ручным способом изготовить аналогичный микрочип с еще меньшими размерами ячеек (25x25 мкм), разделенных полосками гидрофобизированной поверхности покровного стекла к микроскопу, на котором и размещались данные ячейки [Gus hin et al., 1997]. Дальнейшая миниатюризация подобных ДНК-чипов привела к созданию с помощью специально сконструированного микроскопа фрагмента матрицы с гелевыми ячейками размером всего 10x10x5 мкм [Василисков и др., 1998]. [c.406] Вернуться к основной статье