ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Стратегии секвенирования протяженных фрагментов ДНК путем получения делеционных субклонов из "Секвенирование ДНК" События интрамолекулярной коинтеграции, связанные с наличием в векторе транспозируемых элементов, приводят к образованию дочерних молекул, несущих делеции определенных участков. Такие делеции происходят с фиксированных мест транспозона в варьирующие места прилегающего участка ДНК, который в данном случае представляет собой клонированный фрагмент ДНК, предназначенный к секвенированию. С целью получения субклонов, несущих подобные делеции, были созданы различные специализированные вектора для секвенирования протяженных фрагментов ДНК, несущие в своем составе разные транспозоны. Учитывая то, что транспозиция происходит не с очень высокой частотой, для каждого типа векторов были разработаны соответствующие штаммы Е. oli, позволяющие в определенных условиях осуществлять поиск нужных субклонов, обычно по признаку летальности, т.е., в этом случае после транспозиции на чашке Петри вырастали только делеционные варианты исходного фрагмента ДНК. [c.295] Однако все эти векторы и векторные системы имеют существенный недостаток. Поскольку проведение подобных делеционных процедур требует использования специальных штаммов Е. oli и весьма сложной схемы их выращивания, это служит некоторым препятствием к их широкому использованию. Другими отрицательными моментами, особенно для векторов, рассчитанных на клонирование крупных фрагментов ДНК, являются некоторая нестабильность вставки, трудности в ее реориентации, вызванной необходимостью читать другую цепь ДНК. Также для большинства транспозонов характерным является сосредоточение мест их внедрения у дистального конца вставки по сравнению со значительно меньшей частотой данных событий в центральной и проксимальной частях [Ahmed, Podemski, 1997]. [c.298] Вернуться к основной статье