ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Кинетика совместного окисления двух медленно окисляемых субстратов пероксидазы (аскорбиновая кислота и ферроцианид калия) из "Пероксидаза как компонент антиоксидантной системы живых организмов" Е — нативный фермент и его окисленные формы 8, — ферроцианид, Е, —8,, Е -8, — комплексы окисленных форм фермента с ферроцианидом. [c.57] — 8 — комплекс о-дианизидина (8 ) с Е,, Е — 8 — комплекс Е с полуокисленным о-дианизидином, Р, и — продукты индивидуального окисления ферроцианида и о-дианизидина соответственно. [c.58] Имея разные участки связывания, молекулы АК могут осуществлять регулирование каталитического процесса. Однако оставался не решенным вопрос о взаимном регулировании каталитического процесса при окислении двух медленно окисляемых субстратов. Поэтому изучение совместного перксидазного окисления ферроцианида и аскорбиновой кислоты позволило определить участки связывания этих двух медленно окисляемых субстратов на поверхности белковой глобулы фермента и объяснить механизмы их окисления [Рогожин, Верхотуров, 19996]. [c.59] Показано, что при совместном окислении ферроцианида и аскорбиновой кислоты наблюдалось ускорение пероксидазного окисления аскорбиновой кислоты (рис. 11), проявляемое в смешанном типе активации, при котором предварительное связывание ферроцианида облегчало последующее связывание АК, ускоряя ее окисление (рис. 12). Однако конкуренция между субстратами проявлялась еще и в том, что аскорбиновая кислота понижала скорость пероксидазного окисления ферроцианида, ингибируя фермент по смешанному типу, оказывая влияние как на связывание, так и превращение ФК (табл. 6). Характер ингибирования позволяет предположить, что участки связывания АК и ФК в активном центре пероксидазы пространственно удалены. При этом предварительное связывание одной молекулы АК в активном центре фермента затрудняло последующее связывание молекул ферроцианида. Однако связывание с ферментом двух молекул АК полностью блокировало реакции окисления ферроцианида. [c.59] Для объяснения кинетики совместного окисления ферроцианида калия и аскорбиновой кислоты предложена схема 4. [c.59] Е — нативная и окисленные формы фермента 8, — ферроцианид 8 — аскорбиновая кислота Е, — 8,, Е, — 8 , Е — 8,, Е, — 28 — комплексы окисленных форм пероксидазы с субстратами, Е, - 8 - 8,, Е, - 8, - 28 — комплексы окисленных форм фермента с ферроцианидом и одной или двумя молекулами аскорбиновой кислоты К,, К , К,, — константы диссоциации соответствующих комплексов окисленных форм ферментов с субстратами (ферроцианидом и аскорбиновой кислотой) к,, каталитические константы. [c.61] Учитывая взаимное влияние в процессе пероксидазного окисления ферроцианида и аскорбиновой кислоты, можно предположить, что выявленные эффекты обусловлены близким расположением участков связывания обоих субстратов в активном центре пероксидазы, что сказывается на их пероксидазном окислении. Преимущественное окисление донора водорода, возможно, обусловлено конформационными перестройками в соединениях Е, и Е , предварительное связывание с которыми ферроцианида улучшает последующее связывание и превращение двух молекул аскорбиновой кислоты. Наблюдаемый эффект субстрат-субстратной активации и ингибирования в реакциях, катализируемых пероксидазой, обусловлен взаимной конкуренцией субстратов. При этом ингибирование имеет конкурентный характер, обеспечивая последовательное окисление субстратов в присутствии пероксидазы. Поэтому при совместном окислении аскорбиновой кислоты и ферроцианида калия наблюдается ингибирование пероксидазного окисления ферроцианида аскорбиновой кислотой, в то время как сам ферроцианид калия активирует ее окисление. [c.61] Вернуться к основной статье