ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Дыхаиие из "Переживающий срез мозга как объект нейрофизиологического и нейрохимического исследования" Для нервной ткани, обладающей в основном аэробным типом окисления, интенсивность дыхания является важнейшим параметром состояния, отражающим скорость энергетического обмена (Weiss et al., 1972 Лукьянова и др., 1982). [c.61] Срезы нервной ткани весьма удобны для измерения скорости дыхания, причем полученные величины близки к измеренным in vivo. [c.61] В литературе широко используются 3 типа измерений окислительного обмена срезов мозга с помощью аппарата Варбурга с помощью полярографа по скорости выделения меченой Og при добавке в среду инкубации меченой глюкозы. Вкратце остановимся на этих методах. [c.61] Приготовленный срез (глава 1) взвешивают и помещают в сосуд Варбурга, содержащий аэрированную среду инкубации. Ввиду того что масса срезов различна, может понадобиться различный объем среды для каждой пробы. Это затрудняет подсчет константы перехода от манометрических показаний к объему газов. При малой массе среза значительная емкость сосуда может вызвать затруднения точного отсчета малых величин. Для того чтобы избежать этих затруднений, мы предлагаем работать на аппарате Варбурга с помощью не манометрического, а волюметрического метода (Емельянов, 1971). При этом переменные объемы сред не имеют значения, большой сосуд можно при необходимости заменить на малый, а калибровке подвергается лишь цена делений капилляра. [c.61] Однако применение волюметрического метода является лишь технически более удобным, но не принципиально отличным от манометрического метода. [c.62] В качестве поглотителя Og в рукав сосуда Варбурга в последнее время часто помещают не 20 %-ный едкий калий, а 20 %-ный гиамин-алкил (С9-С14)-бензил-триметиламмоний-гидроксид. Последний поглотитель удобнее тем, что в случае одновременного измерения количества меченой углекислоты он хорошо растворяется в сцинтилляционной жидкости на толуоловой основе. [c.62] Для того чтобы подсчитать одновременно количество поглощенного О2 и количество выделенной Oj, существуют специальные методы (Manometris he Methoden. 1965), однако оии достаточно сложны. Проще в параллельных сериях опытов измерить для группы срезов потребление кислорода обычным способом (К,), а также изменение объема газовой фазы при отсутствии поглотителя Oj (Kg). [c.62] Применение полярографического метода описано в соответствующих руководствах, в частности в специальном руководстве по применению полярографии в биологических исследованиях (Кондрашова, 1973). Изготовление простейшего кислородного полярографического электрода описано А. А. Трушановым (1973). [c.64] Открытая и проточная кюветы. Замкнутая кювета обладает большим недостатком — время наблюдения ограничено периодом, когда напряжение кислорода падает не более чем на 15—20 %. Кроме того, в замкнутой кювете трудно сочетать измерение напряжения кислорода, например, с электрофизиологическим исследованием. Эти недостатки в значительной мере устраняются при использовании открытой кюветы с постоянным пополнением уровня Oj. Удачный пример такой кюветы описан Л. Д. Лукьяновой с соавторами (1982, с. 222—224). [c.65] Проточная кювета дает возможность измерения дыхания длительное время, в том числе и в условиях суперфузии переменными средами. [c.65] Вернуться к основной статье