ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Ранние исследования из "Основы ферментативной кинетики" Первые работы по измерению скоростей реакций, катализируемых ферментами, появились в конце девятнадцатого столетия они были выполнены сразу несколькими исследователями. В то время ни один из ферментов не был доступен в чистом виде, методы определения их активности были примитивными и не вошло в практику применение буферов для контроля pH. Кроме того, обычно постановка зксперимента состояла в наблюдении за ходом реакции в течение определенного промежутка времени, а современный подход основан на измерении начальных скоростей для нескольких концентраций субстрата результаты таких измерений обычно легче интерпретировать. Замечательно, что, несмотря на несовершенство методики, ранние исследования привели к значительным успехам. [c.31] Сахароза + Вода Глюкоза + Фруктоза. [c.31] Идея фермент-субстратного комплекса приобрела чисто кинетический смысл благодаря работе Брауна [22]. Как и ряд других исследователей, Браун установил, что скорости ферментативных реакций не соответствуют скоростям реакций второго порядка. Прежде всего он показал, что скорость гидролиза сахарозы при брожении, осуществляемом живыми дрожжами, не зависит от концентрации сахарозы. Противоречию между результатами Брауна, полученными с живыми дрожжами, и результатами О Сул-. дивана и Томпсона для выделенного препарата инвертазы не придавали особого значения, поскольку считалось, что катализ изолированными ферментами принципиально отличается от брожения, осуществляемого живыми организмами. Однако открытие Бухнера [24], показавшего, что бесклеточный (т.е. неживой) экстракт дрожжей может катализировать спиртовое брожение, заставило Брауна [23 ] проверить свои более ранние результаты. Убедившись прежде всего в том, что они корректны, Браун показал, что аналогичные данные можно получить и дЯя очищенной инвертазы. На основании этого он сделал предположение, что если имеет место механизм с образованием, фермент-субстратного комплекса, то скорость реакции не может превышать некоторого предельного значения. При условии, что до своего каталитического распада комплекс существует в течение какого-то промежутка времени, скорость должна достигать максимального значения при такой концентрации субстрата, которой в соответствии с законом действующих масс достаточно, чтобы перевести весь фермент в комплекс. При меньших концентрациях субстрата существенное значение приобретает скорость образования комплекса, и поэтому скорость гидролиза будет зависеть от концентрации субстрата. [c.32] Анри является неполным, потому что оно не учитывает всегда имеющей место обратной реакции зто уравнение предполагает торможение прямой реакции вследствие накопления продукта, которое, однако, не препятствует полному протеканию реакции. В уравнении, учитывающем более реальную ситуацию [например, в приведенном ниже уравнении (2.18) ], допускается возможность того, что реакция при равновесии не доходит до конца. [c.34] Вернуться к основной статье