ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Стандартизация матриксных эффектов из "Новые методы имуноанализа" ГИЯ всего процесса должна быть детально описана и опубликована. Ампулы с таким материалом, который подробно охарактеризован в независимых исследованиях и официально одобрен ВОЗ, затем поставлялись бы вместе с соответствующими стандартами. [c.29] Однако реализация такой программы предполагает выполнение громадного объема научной, организационной и практической работа и соответствующие расходы. Фактически затраты на введение международного стандарта при этом должны были бы удвоиться. Соответствующие предложения были распространены ВОЗ в 1985 г. для выяснения мнения ученых, фирм - производителей наборов и национальных органов контроля [2]. Спектр поступивших откликов был очень широк, начиная от полной поддержки идеи введения контрольного матрикса фирмами, выпускающими наборы, до прямо противоположной точки зрения, согласно которой все проблемы эффекта матрикса могут быть решены с помощью соответствующей оптимизации метода анализа. [c.29] Получение сыворотки с низкими концентрациями TSH представляет собой сложную проблему, поскольку ее получают только от больных, страдающих определенными видами тиреоидной аденомы. В гораздо больших количествах такую сыворотку можно получить от здоровых людей, у которых их собственная тиреоидная функция была подавлена введением Тз в течение нескольких дней. Последние разработки предлагают еще более простой способ получения матрикса путем обработки уже непригодной для клинического применения плазмы из банка крови с помощью лектинов, которые адсорбируют эндогенный TSH. В настоящее время проводятся совместные эксперименты с первыми двумя типами сывороток. Полученные результаты и выводы будут представлены в Экспертный комитет ВОЗ по биологической стандартизации. [c.29] Был выбран и лиофилизован в ампулах лучший образец. После предварительной проверки новый стандарт был калиброван против МСП для биоанализа гипофизарных FSH и LH 27 группами у,ченых в 13 странах. Эксперименты включали также использование ряда других калиброванных материалов, в том числе и соответствующих сывороток. [c.33] Поскольку новый стандарт должен представлять активный FSH, то величина 80. м.ед. на ампулу кажется наиболее обоснованной. Большинство участника международных испытаний согласились с этим выводом, и позднее Экспертный комитет ВОЗ по биологическим стандартам утвердил материал с кодом 83/575 в качестве третьего международного стандарта FSH с содержанием 80 м.ед. на ампулу. [c.34] После принятия более чистого стандарта для FSH должны быть введены и стшадарты для субъединиц или подобных FSH веществ, если будет доказано, что их определение представляет практический интерес. При необходимости будтг введены международные стандарты и для изолированных а- и /3-субьединиц FSH. [c.34] В этой главе процедуре замены международных стандартов было уделено много внимания, поскольку, по мнению автора, очень часто замена стандартов вызывает недоразумения только потому, что не поняты важность и сущность этого процесса. [c.34] В последние годы для крупномасштабного получения труднодоступных пептидов все более широкое распространение получают методы генной инженерии (технологии рекомбинантных ДНК). Некоторые из белков (инсулин, гормон роста), полученных этим методом, абсолютно идентичны природным белкам человека. Другое вещества, например гликопротеин эритропоэтин, идентичны нативным веществам по структуре полипептидной цепи, но немного отличаются от них по строению боковых углеводных цепей в зависимости от продуцирующей линии животных клеток. Получение белков и некоторых гликопротеинов в качестве стандартов генно-инженерным путем наиболее удобно в случае труднодоступных объектов (интерлейкины 1а и ренин, интерфероны человека). Проблемы контроля производства и детального исследования свойств рекомбинантных продуктов рассмотрены в работах [11, 12]. [c.35] Применение моноклональных антител для иммуноанализа пептидов требует большой осторожности, поскольку высокоспецифичные моноклональные антитела могут взаимодействовать, например, только с одним из изогормонов. По этим же причинам нельзя использовать слишком специфичные моноклональные антитела и для аффинной очистки пептидов. Кроме того, существует опасность разрушения образца при его элюировании с аффинной колонки под действием pH и ионной с ы раствора. И наконец, следовые количества антител могут загрязнять очищенный продукт и влиять на результаты анализа. [c.35] Автор благодарит Фиону Форрестер за большую помощь в подготовке этой главы. [c.36] МОЩЬЮ трансфекции генов иммуноглобулинов в миеломные клетки [14-16]. Применение обычных и новых моноклональных антител подробно рассмотрено в работах [17, 18 ]. [c.38] Наиболее важные области применения моноклональных антител перечислены в табл. 3.1. [c.38] Существуют два подхода к культивированию животных клеток. Первый подход основан на иммобилизации и включении клеток в твердую матрицу. В качестве примера можно привести перфузию в пористые волокна [19], применение микрокапсул [20], агарозных микрошариков [21 ] или керамических кассет [22]. Второй подход включает культивирование клеток в гомогенной суспензии. [c.39] Вернуться к основной статье