ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Определение интенсивности фиксации из "Биогеотехнология металлов Практическое руководство" Гидролизат отделяют от твердой фазы центрифугированием при 5000 об/мин в течение 5 минут. После центрифугирования гидролизат должен быть прозрачным и бесцветным. Если это условие нарушается, то возможно завышение показаний по белку. Появление окраски может быть связано с выходом в гидролизат ионов металлов и сульфидной серы из перешедших в него продуктов деструктирования сульфидных минералов. [c.78] Поэтому, в тех случаях, когда получаемые гидролизаты имеют окраску, проводят обработку их перекисью водорода (1 капля Н Ог на 1 мл гидролизата) и вьвдерживают 3 минуты лри комнатной температуре. [c.78] В результате такой обработки сульфид переходит в сульфат. Избыток перекиси водорода удаляют прогреванием на кипящей водяной бане. Полноту удаления перекиси водорода контролируют по роданиду аммония или иодистому калию. [c.78] С полученным осадком белка проводят колориметрическую реакцию по модифицированному методу Лоури [164]. Для этого к осадку добавляют 1 мл воды и 1 мл раствора А . Реакционную смесь тщательно перемешивают и вьщерживают 10 минут при комнатной температуре. После этого к ней добавляют 0,5 мл раствора Фолина , разведенного в 10 раз, перемешивают, вьщерживают 30 минут при комнатной температуре и измеряют оптическую плотность при длине волны 750 нм. Установка прибора на нулевое положение осуществляется по контрольному раствору, состоящему из 1 мл щелочного гидролизата, полученного из исходного концентрата с добавлением всех компонентов реакции. [c.78] На точность анализа влияют также ионы некоторых металлов, в частности, меди. Для выяснения ошибки анализа к пробам со стандартными растворами альбумина объемом в 1 мл следует добавлять по 1 мл жидкой фазы пульпы, где бактерии предварительно удалены центрифугированием. К образцам добавляют по 4 мл 0,5 Н NaOH и отбирают по 1 мл на анализ. Осаждение белка и его колориметрическое определение проводят методом описанным выше. Полученные данные сопоставляют с показаниями стандартных растворов белка. Прямая пропорциональная зависимость между концентрацией белка и оптической плотностью конечного раствора соблюдается в пределах от 0,3 до 2,0 мг/мл белка в пульпе. [c.79] Данный метод проверен и используется при выщелачивании сульфидных концентратов, не содержащих меди. [c.79] Жидкая фаза пульпы. Для определения белка биомассы в жидкой фазе пульпы твердую часть отделяют центрифугированием при 1000 об/мин в течение 1 мин, а клетки концентрируют при 6000 об/мин в течение 20 мин. Осадок подсушивают опрокидыванием центрифужных стаканчиков на фильтровальную бумагу. Благодаря этой процедуре исключается влияние ионов тяжелых металлов из выщелачивающих растворов на количественное определение белка. Следовые количества их, сорбирование клетками, не вносят искажений в результаты анализов. Гидролизуют клетки в том же режиме, как и при определении белка биомассы в пульпе. Выпавший осадок окисного железа отделяют центрифугированием при 6000 об/мин. Белок в супернатанте определяют по методу Лоури. Для этого к 1 мл гидролизата добавляют 5 мл раствора С , вьщерживают 10 минут при комнатной температуре, после чего добавляют 0,5 мл раствора Фолина, разбавленного в 2 раза. Оптическую плотность измеряют через 30 мин при длине волны 750 нм. [c.79] По разности содержания белка в пульпе и надосадочной жидкости вычисляют содержание белка клеток, сорбированных на частичках концентрата. Для расчета количества сухой биомассы определяют содержание белка в определенной навеске лиофильновысушенных клеток. [c.79] Например, исследование тонкого строения бактерий в динамике позволяет изучить влияние физико-химических условий на ультраструктурную организацию клеток и в конечном счете обнаруживать связь между структурой и функцией организма в целом. Основные приемы электронно-микроскопических методов исследования хорошо отработаны. При работе с растворами биомассу клеток обьмно получают путем центрифугирования или в полевых условиях путем фильтрования через мембранные фильтры (размер пор 0,2—0,3 мкм). Однако работа с рудой или пульпой имеет свою специфику, поскольку большая часть клеток связана с твердой фазой, мешающей получению качественных препаратов. Задача здесь сводится к отделению клеток от твердых частиц и получению суспензии клеток, находящихся на поверхности минералов. Для этого проводят центрифугирование пульпы при 1000 об/мин в течение 1 мин для отделения грубых частиц минералов. Затем пульпу центрифугируют при 6000 об/мин в течение 20 мин. При этом клетки отделяются от твердых частичек и собираются в виде пленки на поверхности твердого осадка. Налет клеток осторожно смывают с поверхности минерального осадка средой 9К без железа, после чего осадок трехкратно промывают средой с последующим центрифугированием, каждый раз собирая при этом клетки с поверхности осадка. Из объединенной суспензии клеток минеральные частицы удаляют центрифугированием при 1000 об/мин в течение 3 минут, а клетки концентрируют центрифугированием при 6000 об/мин в течение 20 минут. [c.80] Тотальные препараты готовят следующим образом. Равные по объему капли бактериальной суспензии наносят на сеточку с пленкой-подложкой и добавляют 1%-ый раствор фосфорновольфрамовой кислоты (pH 2,0). Время экспозиции - 30 сек. В случае вьшадения осадка, гидрата железа, сеточки необходимо промыть подкисленной водой (pH 2). [c.80] Об активности роста хемолитоавтотрофных бактерий при кучном, подземном и чановом выщелачивании металлов можно судить по интенсивности фиксации клетками СОз- Ниже приводится ряд примеров использования данного метода. Свежеотобранная кислая вода, содержащая бактерии и Ре , по 10 мл наливается в склянки объемом 12—15 мл, которые закрываются резиновой пробкой так, чтобы под ней остался воздух. Затем шприцем, прокалывая пробку, вносят точно по 0,1 мл раствора Ыаз СОз удельной активности 110 имп/мин в 1 мл. Эту операцию нужно проводить обязательно в закрытой склянке, т.к. испытуемые растворы имеют низкое значение pH, и радиоактивный карбонат находится в виде СО . Каждый вариант опыта ставится в трех повторностях. Раствор меченой соды предварительно фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,25-0,3 мкм, разливают в ампулы, которые запаивают и кипятят три раза на водяной бане. В таком виде раствор радиоактивной соды может храниться продолжительное время. Часть опытных склянок помещают в рудничную воду при естественной температуре, а часть - при комнатной температуре. Время экспозиции зависит от ряда факторов (температуры, количества бактерий, и др.) и может длиться от нескольких часов до Нескольких суток. [c.81] По окончании опыта в каждую склянку вносят по 0,5 мл 40% формалина и содержимое перемешивают. Дальнейшие операции проводят в лаборатории. Раствор профильтровывается через мембранные фильтры с размерами пор 0,25-0,3 мкм, фильтры обрабатывают 2% ной соляной кислотой для удаления осадка (гидраты окиси железа). Радиоактивность бактерий определяют на сцинтилляционном счетчике. [c.81] Количество бактерий определяют до и после опыта либо методом предельных десятикратных разведений, либо по белку. [c.81] Таким образом, данный метод позволяет учитывать как адсорбированные на твердых частицах клетки, так и клетки в жидкой фазе. [c.82] Вернуться к основной статье