ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Основные компоненты неонкогенных Ti-плазмидных векторов из "Генная инженерия растений Лабораторное руководство" Принимая во внимание характер переноса генов, осуществляемого агробактериями, любую клонированную чужеродную ДНК можно перенести в геном клетки двудольного растения. Чужеродная ДНК, которую собираются перенести, должна быть фланкирована концевыми последовательностями Т-ДНК и стабильно поддерживаться в штамме агробактерии, несущем полный набор i iV-генов в цис- либо троне-положении (т. е. локализующихся на отдельной плазмиде — помощнике вирулентности или хелперной плазмиде). Здесь следует отметить, что были описаны и хромосомные гены агробактерий, связанные с вирулентностью. Считается, что их продукты участвуют в узнавании бактерией поверхностных компонентов растительной клеткп и последующем прикреплении. [c.18] Потеря онкогенных свойств означает, что в этом случае трансформированные ткани невозможно идентифицировать как неопластические выросты, клетки которых легко селектировать по их способности к росту на среде, не содержащей фитогормонов. Для разрешения проблемы идентификации трансформированных клеток между повторами длиной 25 п. н. встраивают бактериальные гены устойчивости к антибиотикам, помещенные под контроль промоторов Т-ДНК и снабженные сигналами полиадени-лирования. Такие химерные гены устойчивости к антибиотикам эффективно экспрессируются в растительных клетках как доминантные признаки в любом генетическом окружении. Удобно, чтобы маркерные гены были тесно сцеплены с чужеродной ДНК по двум причинам. Во-первых, это позволяет осуществлять прямую селекцию трансформированной ткани растения, чтобы убедиться в переносе чужеродной ДНК. И во-вторых, это гарантирует, что фланкирующая чужеродная ДНК в конкретном трансформированном клоне, полученном в результате селекции, не была встроена в нетранскрибируемую область генома. [c.18] rhizogenes, несущие нормальную Ri-плазмиду, приводит к стабилизации последовательностей промежуточного вектора в результате внутримолекулярной гомологичной рекомбинации в Ri-плазмиде [32]. [c.27] Приведенный в табл. 1.1 и 1.2 перечень векторов ни в коей мере не является исчерпывающим, однако он дает представление о диапазоне свойств векторов для трансформации общего типа. В то же время существуют разнообразные векторы трансформации растений, предназначенные для специальных целей (рпс. 1.6). [c.27] Аналогично этому были разработаны векторы, содержащие беспромоторные индикаторные гены с множественным линкером в 5 -области для встраивания промоторных последовательностей в качестве примера можно привести вектор для тестирования промоторов pGA482, который был описан в 1986 г. [3]. [c.29] Векторы маркирования генов вблизи правой границы Т-ДНК содержат лишенные промотора селектируемые маркерные гены. Случайная интеграция такой Т-ДНК рядом с геномной последовательностью, обладающей промоторной активностью, восстанавливает активность маркерного гена, что позволяет селектировать трансформанты данного типа на среде, содержащей антибиотики. Поэтому такие векторы полезны для клонирования последовательностей, обладающих промоторной активностью [5]. [c.29] Вернуться к основной статье