ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Свойства одетых везикул. Клатрин из "Биохимия мембран Эндоцитоз и экзоцитоз" разборка одетых везикул протекает при щелочных значениях pH, сборка же происходит при pH 7,0 последний процесс тормозится ацидотропными веществами. В мембранах одетых везикул локализована протонная АТФаза немитохондриального типа, т. е. гидролиз АТФ протекает на внешней поверхности везикул, при этом происходит подкисление матрикса везикул. [c.46] В среде с высокой ионной силой (0,5—0,6 М KI 0,25М Mg l2) из одетых везикул экстрагируется клатрин. Последующий диализ этой суспензии против буфера с низкой ионной силой приводит к сборке корзинчатых структур, не идентичных полностью одетым везикулам для нормальной сборки необходимы минорные белки. Очищенный клатрин в этих условиях не поли-меризуется. Клатрин (8,25) при рН 7,0 в присутствии К+ и Mg-+ образует решетчатые структуры в отсутствие Mg +—агрегаты диаметром 16 нм, а при pH 7,5 в отсутствие солей образует прозрачные растворы, содержащие линейные волокна в присутствии 0,2 М Hs OONa образует крупные полимеры с К 150 и 3005. Ограниченный протеолиз способствует разборке одетых везикул и появлению в среде инкубации клатриновой сетя без легких цепей. [c.46] Липидный состав одетых везикул изучен слабо. Во фракции одетых везикул мозга соотношение холестерин/фосфолипиды равно 0,1—0,3 (для сравнения плазмалемма — 0,3—1,2, мито- (ондрии — 0,03—0,09, ЭПР — 0,03—0,08). [c.47] Большинство исследователей предполагают, что мембраны каймленных ямок содержат довольно мало холестерина, который, как известно, регулирует жидкостные свойства мембран (чем больше содержание холестерина, тем больше ригидность мембран). Снижение жидкостных свойств мембран в зоне окаймленных ямок может способствовать инвагинации ямок и их отделению от мембран, т. е. образованию одетых везикул. [c.47] Биологический смысл формирования одетых везикул остается неясным. Может быть, клатриновая шуба необходима как форма самосохранения одетых везикул (и их содержимого) от лизиса, а возможно, что шуба необходима для сцепления этих органелл с цитоскелетом и последующего их транспорта в клетке. [c.47] Априорно трудно допускать, что простое связывание лигандов с плазмалеммой обязательно приведет к захвату его клеткой, поскольку адсорбированный лиганд должен быть оккупирован сегментами мембраны с образованием инвагинации и только после этого интернализирован внутрь клетки. Отмечается высокая скорость связывания лигандов с плазмалеммой и относительно низкая скорость интернализации. Интернализация тормозится при 4°С, действии ЭДТА, протеиназ, конкурентных антагонистов лигандного связывания, при низком значении pH. [c.47] Процесс интернализации, т. е. образования одетых везнкул не ингибируется циклогексимидом. В первые минуты после инициации специфического эндоцитоза часть одетых везикул и гладких эндосом может слипаться с плазмалеммой. Этот процесс рециклизации мембран рецепторами и лигандами не чувствителен к циклогексимиду. Некоторые рецепторы (Рс-рецепторы макрофагов) даже в отсутствие экзогенных лигандов могут интернализироваться и попадать в эндосомы, что свидетельствует о спонтанной рециклизации рецепторов, обусловленной эндогенными лигандами. [c.49] Один фибробласт каждые 2 ч интернализирует внутрь клетки область, эквивалентную всей клеточной поверхности. Для компенсации быстрой потери участков плазмалеммы необходима столь же быстрая рециклизация мембран. Одна часть рецепторов, попадая в клетку, разрушается в лизосомах, например рецепторы фактора роста эпидермиса, инсулина. В этом случае необходимо определенное время для ресинтеза белка и его встраивания в мембрану. Другая часть рецепторов, попадая в клетку, останется сохранной и постепенно снова возвращается в плазмалем-Л1у, например рецепторы 02-макроглобулина — ингибитора плазматической протеиназы. [c.50] В результате сложного цикла эндоцитоза и рециклизации мембран и их компонентов (рецепторов) мембраны одетых везикул, эндосом, вакуолей и плазмалеммы не выравниваются по своему составу. Очевидно, существует специфический отбор белков плазмалеммы в ходе образования одетых везикул, тот же строгий отбор происходит и в ходе рециклизации, поэтому мем-1браны не смешиваются . [c.50] Судьба проникших в клетку лигандов неодинакова, но большинство из них проходят испытания в лизосомах. Лизосомные гидролазы разрушают попавшие в лизосомы лиганды, а продукты их деградации удаляются из клетки либо, как в случае ЛНП, переносятся в цитоплазму и используются там в качестве строительного материала. Было бы слишком расточительным уничтожать в лизосомах и рецепторы. С помощью ингибиторов синтеза белка можно блокировать образование и синтез новых рецепторов, а рециклизация рецепторов будет продолжаться. [c.50] Время жизни большинства рецепторов намного выше времени жизни соответствующих лигандов. Каждая молекула рецептора связывает лиганд один раз в 10—15 мин и сохраняет активность в течение многих часов. Непрерывная циркуляция рецепторов свойственна тем из них, которые локализованы в окаймленных ямках постоянно (даже в отсутствие лиганда), так как указанные ямки затем впячиваются. Другие рецепторы вступают в цикл кругооборота только после связывания лиганда, поскольку только в такой форме они мигрируют в мембране к окаймленным ямкам. [c.50] Эндосомы затем преобразуются в новую органеллу URL (от англ. — место разделения рецептора и лиганда см. рис. 9). В этой везикулярно-тубулярной органелле происходит диссоциация рецептора и лиганда и их перераспределение, в результате которого лиганды накапливаются в свободной форме в везикулярной части органеллы, а рецепторы — в тубулярной части. Молекулы рецептора остаются погруженными в мембрану органеллы рецепторы либо образуют кластер на одном из полюсов везикулярной части органеллы, которым она примыкает к тонким, окруженным мембранами трубочкам (или сливается с ними), либо оказывается внутри самих трубочек. Диссоциация комплекса лиганд — рецептор в URL происходит из-за низкого значения pH внутри этой органеллы. [c.51] Анализ срезов печени, полученных на более поздних этапах эндоцитоза, показал, что везикулярная часть URL (эндоцитозная вакуоль) сливается с лизосомами, где происходит деградация лиганда. Прежде чем произойдет слияние, тубулярные участки, нагруженные рецепторами, отсоединяются от везикул URL, так что рецепторы избегают воздействия лизосомных ферментов. Тубулярные структуры, вероятно, обеспечивают возврат рецепторов в плазмалемму. Каким образом это происходит, пока неясно возможны два варианта либо с помощью цитоске-летной системы, либо тубулярная система неподвижна и простирается от плазмалеммы до центра клетки подобно ЭПР. [c.51] Вернуться к основной статье