ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Открытие ядерной дРНК в эукариотических клетках из "Гены высших организмов и их экспрессия" Роль клеточного ядра в синтезе РНК- В конце 1950-х годов в литературе шли жаркие споры о том, где происходит синтез РНК — в ядре или цитоплазме. Постепенно складывалось мнение, что синтез РНК практически полностью происходит в ядре. Это хорошо укладывалось в схему ДНК- РНК- белок, поскольку ядерная локализация, по крайней мере основной части ДНК, не вызывала сомнений. В пользу того, что синтез РНК идет в ядре, возможно на матрице ДНК, прежде всего говорили результаты опытов по включению радиоактивных предшественников в РНК ядра и цитоплазмы, которые были выполнены во многих лабораториях мира. Клетки инкубировали в течение короткого времени с радиоактивным предшественником, например уридином-[ Н], и затем смотрели на распределение включившейся метки между ядром и цитоплазмой с помощью так называемой авторадиографии. Срезы клеток покрывали фотоэмульсией и после выдержки и проявления видели, что при короткой инкубации клеток с меченым предшественником практически вся меченая РНК находится в ядре и лишь позднее начинает поступать в цитоплазму. [c.8] Было неясно, каким образом на матрице ДНК синтезируется РНК совсем другого нуклеотидного состава, т. е. возникало то же самое противоречие, что и при сравнении нуклеотидного состава ДНК и РНК бактерий, только еще более ярко выраженное. [c.9] Чтобы решить этот вопрос, предпринимались попытки изучить природу ядерной РНК, но это затруднялось отсутствием в то время методов выделения ядер, при которых РНК не деградировала бы. [c.9] Мы начали пробовать разные эмпирические способы фракционирования РНК фенольных ядер . Несколько опытов не дали успеха. Наконец, в одном из опытов фенольные ядра вначале обработали смесью 5 %-ного п-амино-салицилата фенола, а затем, после центрифугирования, материал интерфазы 0,14 М Na l — фенолом при 65°. При этом около половины РНК перешло вместе с ДНК в водную фазу во время первой экстракции, а другая часть — во время второй (см. табл. 1). Нуклеотидный состав второй фракции РНК оказался очень похож на рРНК (G+ /A-j-U l,5), а у первой он резко отличался. Отношение G+ /A+U составляло 0,8 т. е. было близко к таковому для ДНК (0,7). [c.12] Шла весна 1961 г. Мы стали думать о природе РНК Аи-типа, а также о публикации полученных данных. В это время стали появляться первые слухи о выявлении мРНК в клетках бактерий. Естественно было предположить, что и мы обнаружили мРНК, или информационную РНК животных клеток. Странным было лишь ее очень высокое содержание — около /з всей РНК фенольных ядер . [c.14] Мирский (США). Хотя в его собственном докладе ничего похожего не было, но весной 1962 г. он и его сотрудники сообщили о сходных с нашими результатах. Был использован другой метод фракционирования, который в отличие от нашего давал полностью деградированную РНК (4-68). Дальнейшего развития его работа не имела. [c.14] РНК со смешанным нуклеотидным составом, а при 60 и 65° — чистая дРНК (0+С/А+и=0,7—0,8) (см. табл. 1,2). Метод, по крайней мере на использованных типах клеток — асцитной карциноме Эрлиха мышей и печени крысы,— был простым и очень хорошо воспроизводимым. Работа была опубликована в 1962 г. [c.15] Метод фенольного термического фракционирования (далее использовались лишь три ступени 40, 55 и 65°, а позднее еще и 85°) давал возможность не только продемонстрировать существование ядерных дРНК и рРНК, но и нарабатывать их в миллиграммовых количествах, а следовательно, сделал возможным изучение их свойств. [c.15] Вернуться к основной статье