ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Пояснения к программе из "Твердофазный синтез пептидов" Объем растворителя для промывки подбирают пропорционально количеству используемого полимера-носителя. Для малого реактора, рассчитанного на применение 1 г полимера, берут по 10 мл промывной жидкости. В случае же большого реактора, рассчитанного на использование 7—10 г полимера, объем промывного растворителя может составлять 30—60жл. [c.89] Стадия I. Промывка диоксаном (3 раза). [c.89] Стадия 2. Обработка 4 н. раствором НС1 в диоксане (о приготовлении см. стр. 74). [c.89] Во время этой стадии деблокирования выделяется некоторое количество углекислого газа. При больших загрузках полимерного носителя сосуд приоткрывают и после удаления большей части углекислого газа вновь плотно закрывают. [c.89] В случае применения НФС-аминокислот вводят следующие изменения. На стадии 1 в качестве промывного растворителя используют хлороформ. На стадии 2 в качестве деблокирующего реагента применяют смесь хлороформа с таким количеством 1 н. раствора НС в СНзСООН, чтобы на 1 экв присутствующих НФС-групп приходилось 3 экв НС1 время деблокирования 10 мин. На стадии 3 пептидил-полимер промывают хлороформом, ДМФА и спиртом (по 3 раза каждым растворителем) [88]. Если в пептиде содержится остаток триптофана, НФС-группу нельзя удалять действием НС), для этой цели следует применять методику, основанную на использовании тиоацет-амида [45, 60] (см. стр. 112—ИЗ). [c.89] Для отщепления БОК-групп от некоторых аминокислот требуется 30-минутная обработка 4 н. раствором НС1 в диоксане. Поскольку реагент частично разбавляется растворителем, уже содержащимся в полимере, условия деблокирования могут оказаться нарушенными. Во избежание этого некоторые авторы рекомендуют предварительно промывать пептидил-полимер раствором НС1 в диоксане (встряхивание в течение 1 мин), а затем подвергать обычной обработке в течение 30 мин. Это особенно важно при работе на автоматическом приборе, где происходит дополнительное разбавление реагента растворителем, остающимся в соединительных трубках. [c.90] Стадия 3. Промывка диоксаном (3 раза). [c.90] Стадия 4. Промывка хлороформом (3 раза). [c.90] После этой стадии пептидил-полимер можно извлечь из реактора для использования в другом пептидном синтезе или для анализа. Иногда после промывания диоксаном и перед извлечением пептидил-полимера из реактора вводят стадию промывки спиртом, так как суспензия пептидил-полимера в хлороформе может вызвать затруднения при дальнейшей обработке. После проведения последней операции деблокирования (см. стр. 27—28) пептидил-полимер промывают спиртом не менее 6 раз. [c.90] Реагент. готовят из очищенного триэтиламина (1 об. ч.) и чистого хлороформа (9 об. ч.). Компоненты смешивают непосредственно перед применением. [c.90] Стадия 6. Промывка хлороформом (3 раза). [c.90] Стадия 7. Промывка хлористым метиленом (3 раза). [c.90] Стадия 8. Прибавление раствора БОК-аминокислоты в хлористом метилене. [c.90] Число молей прибавляемой БОК-аминокислоты обычно превышает число молей первой аминокислоты. [c.90] Присоединенной к полимеру, в 2,5 раза. В тех случаях, когда из-за стерических затруднений понижаются выходы реакции пептидообразования, берут еще больший избыток БОК-аминокислоты и карбодиимида. Объем растворителя на стадии образования пептидной связи должен быть минимальным, чтобы тем самым содействовать реакции пептидообразования и свести к минимуму побочную реакцию перегруппировки, ведущей к образованию ацилмочевины. [c.91] Стадия 10. Промывка хлористым метиленом (3 раза). [c.92] Если необходимо прервать синтез на ночь, это целесообразно делать на данной стадии, оставляя пептидил-полимер суспендированным в хлористом метилене. [c.92] Вернуться к основной статье