ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Защита и деблокирование а-аминогрупп из "Твердофазный синтез пептидов" Хотя в первом твердофазном синтезе пептида, описанном Мэррифилдом, для маскирования а-аминогрупп была использована бензилоксикарбонильная (карбобензокси-) защитная группировка, позднее Мэррифилд установил, что г/ ег-бутилоксикарбонильная защитная группа гораздо лучше удовлетворяет всем требованиям, так что почти во всех последующих твердофазных синтезах пептидов использовалась именно эта группа. [c.40] Если применять защитную карбобензоксигруппу при твердофазном синтезе пептидов, содержащих аспарагиновую или глутаминовую кислоту, то боковые карбоксильные группы можно защищать метиловыми эфирами. Последние устойчивы к действию бромистого водорода в уксусной кислоте, но расщепляются, если пептид от полимера отделяют методом омыления. [c.43] В настоящее время грег-бутилоксикарбонильная группа является стандартной защитной группировкой для а-аминогрупп при твердофазном пептидном синтезе (см. рис. 2). грег-Бутилоксикарбонильную группу можно удалять как безводным хлористым водородом в органическом растворителе, так и безводной трифторуксусной кислотой. Ни один из этих реагентов не расщепляет бензиловые эфиры. Таким образом, здесь имеется необходимое для успеха синтеза различие между устойчивостью связи пептида с полимерным носителем и связи защитной группировки с а-аминогруппой. В качестве носителя можно использовать ненитрованный сополимер стирола с дивинилбензолом, а конечный пептид можно отщеплять от полимера безводным бромистым водородом в трифтор уксусной кислоте или безводным фтористым водородом. Установлено, что оба метода отщепления дают удовлетворительные результаты и позволяют избежать осложнений, присущих отщеплению омылением. Имеются защитные группы, которые обеспечивают маскирование функциональных групп боковых радикалов аминокислот и в то же время совместимы с трет-бу тилоксикарбонильной группой. В настоящее время осуществлен синтез многих пептидов твердофазным методом при использовании этих групп. [c.43] В качестве растворителя для хлористого водорода был предложен диоксан, не содержащий перекисей. Этот реагент исключает ацетилирование и теперь более широко используется при твердофазном синтезе. На некоторых стадиях синтеза гептадекапептида ангио-тензинилбрадикинина защитные группы не удавалось удовлетворительно удалять действием хлористого водорода в уксусной кислоте, в то время как применение хлористого водорода в диоксане позволило успешно провести синтез [75]. При конденсациях с использованием карбодиимида присутствие муравьиной кислоты в диметилформамиде также может быть причиной прекращения роста пептидных цепей поэтому весь диметилформамид, используемый в качестве растворителя для реакций конденсации, необходимо тщательно очищать. [c.49] В связи с введением диоксана в качестве растворителя на стадиях деблокирования концентрацию хлористого водорода необходимо повысить до 4 М, чтобы обеспечить полное удаление трег-бутилоксикар-бонильных защитных групп в течение 30 мин — продолжительность процесса желательная на этой стадии. В диоксане, являющемся значительно более основным растворителем, чем уксусная кислота, большая часть хлористого водорода, вероятно, связана с растворителем в виде оксониевой соли. Установлено, что грет-бутилоксикарбонильные производные различных аминокислот будучи связаны с полимерным носителем сильно отличаются по своей чувствительности к действию хлористого водорода в диоксане некоторые производные расщепляются при обработке 2 М раствором НС1 в диоксане в течение 10 мин, для расщепления других необходима обработка 4 М раствором НС1 в диоксане в течение 30 мин. Поскольку реагент всегда частично разбавляется растворителем, уже присутствующим в полимере, полное удаление устойчивых гр г-бутилоксикарбонильных групп можно обеспечить предварительной промывкой пептидил-полимера раствором хлористого водорода в диоксане с последующим проведением стандартной реакции деблокирования в течение 30 мин. [c.49] При использовании диоксана в качестве растворителя на стадиях деблокирования необходимо учитывать возможность окислительного расщепления чувствительных к перекисям остатков аминокислот за счет их взаимодействия с теми перекисями, которые накапливаются в диоксане при хранении. Несмотря на то, что перед приготовлением раствора хлористого водорода в диоксане последний обрабатывают окисью алюминия с целью удаления уже имеющихся в нем перекисей, при стоянии этого реагента в течение нескольких дней или недель в нем могут образоваться новые перекиси. Однако пока нет определенных доказательств того, что эти перекиси оказывают какое-либо вредное действие. [c.50] Поскольку окисляющие реагенты в кислой среде могут вызывать затруднения при синтезе триптофа-новых пептидов, применение диоксана в таких синтезах необходимо исключить. При твердофазном синтезе триптофановых пептидов можно применять в качестве реагента хлористый водород в уксусной кислоте, осуществляя деблокирование при пониженной температуре, либо проводить все кислотные обработки в процессе синтеза в присутствии восстановителя, (см. стр. П2—П4). [c.50] Предотвращающая подобную нежелательную циклизацию N-кoнцeвoгo остатка глутамина при расщеплении пептидов по Эдману, может оказаться полезной и в этом случае когда для отщепления трег-бутилокси-карбонильной группы от остатка глутамина применили безводную трифторуксусную кислоту, то действительно оказалось, что следующая реакция конденсации протекает нормально. [c.51] Вернуться к основной статье