ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Белки (протеины) Методы выделения и очистки белков из "Биологическая химия" Методы выделения белков из тканей животных и растений основаны главным образом на их растворимости в воде и водно-солевых растворах с последующим осаждением их водоотнимающими (дегидратирующими) средствами. К таким водоотнимающим веществам относятся прежде всего спирт, ацетон, концентрированные растворы сернокислого аммония (N1 4)2804 и нейтральных солей щелочных металлов (Na l, N32804, b gSOt) и некоторые другие вещества. [c.7] Материалом для изучения свойств белков могут служить белок куриного яйца, белки сыворотки крови, молока, мыщц, кожи, волос, семян гороха, фасоли, подсолнечника и т. д. [c.7] Экстракция растворимых белков из тканей происходит только после разрушения их клеточных оболочек, так как последняя непроницаема для белковых молекул. Разрушение клеток проводят обы чно механическим путем, растирая ткань с песком в ступке или в гомогенизаторе. [c.7] Существуют и другие методы, например попеременное за.мо-раживание и оттаивание. [c.7] Экстракты, полученные любым из описанных выше методов, центрифугируют для удаления нерастворимых белковых частичек. Неорганические соли удаляют диализом, промыв белок дистиллированной водой. Некоторые белки нерастворимы в дистиллированной воде и выпадают в осадок. После экстрагирования из клеток жира, эфиров, углеводов и растворимых белков водой и органическими растворителями можно легко получить нерастворимые клеточные белки. Все нерастворимые белки можно также перевести в растворимые нагреванием с разбавленными растворами едкого натра, однако часть из них разрушается с образованием иизкомолекулярных продуктов. [c.7] Предполагается, что процесс высаливания белка в большинстве случаев не нарушает нативных (естественных) свойств з он , в частности, не теряют способности после удале] пя еодоотнн-маюших средств вновь растворяться в воде. [c.9] Осаждение белков из растворов с сохранением их нгт Еных свойств может быть осуществлено такл е при температуре ст —3 до —некоторыми органическими веществами (ацетоном, спиртом). Изолированные белки подвергают лиофильной сушке. Вода при этом удаляется в вакууме. Лиофильная сушка широко применяется для получения в сухом виде медицинских препаратов. например различных вакцин, сывороток, у-глобулина и т. д. [c.9] Для изучения биологических особенностей белковых веш,еств и их химической структуры важно получить индивидуальные белки, свободные от примесей. Однако это связано с определенный] трудностями. Дело в том, что в большинстве случаев белки неоднородны, они легко связываются как друг с другом, так и с иными веществами, образуя с ними часто довольно прочные комплексные соединения. Расчленить эти комплексы нелегко. Поэтому получение белков в кристаллическом виде не всегда еще гарантЕфует выделение индивидуальных белков, так как некоторые белки, близкие по своим свойствам, кристаллизуются вг лес-те с образованием кристаллов одинаковой формы. [c.9] В органической химии образование кристаллов считаете. ], как правило, окончательным доказательством того, что исследуемое вещество является однородным (гомогенным). Если к тому же кристаллы плавятся после перекристаллизации при одксй и тон же температуре, то однородность соединения считается несомненной. Однако этот критерий нельзя применять к кристаллам белковых веществ. Для оценки гомогенности выделенного белка наиболее надежным методом является проба на постоянсто растворимости. Это основано на правиле фаз, согласно которому растворимость гомогенного вещества, находящегося в твердой фазе, зависит только от температуры. Другими словами, растворимость индивидуальных белков, находящихся в смеси. [c.9] Исследование поведения кристаллических белков в электрическом поле (методом электрофореза) показало, что способность некоторых белков к кристаллизации нельзя рассматривать как доказательство их гомогенности. Так, например, оказалось, что яичный альбумин представляет собой смесь по крайней мере двух компонентов, глобулин сыворотки крови состоит из трех и более основных компонентов, обозначаемых а-, р- и у-глобулины.. Таким образом, экстракты, полученные из клеток или органов, содержат смесн различных белков. [c.10] Существует ряд методов, с помощью которых удается разделить белковые комплексы на фракции и выделить чистые индивидуальные белки. Критерием чистоты белков служат следующие показатели получение белка в кристаллическом состоянии (однако при этом следует иметь в виду, что некоторые белки образуют смешанные кристаллы) дальнейшая неразделяемость при электрофорезе и ультрацентрифугировании независимость растворимости от количества твердой фазы постоянство аминокислотного состава определенный молекулярный вес для многих белков — постоянство специфических биологических свойств (ферментативная активность, гормональная активность и т. п.). [c.10] Фракционирование белковых смесей. Впервые фракционирование растворимых белков было проведено путем высаливания сернокислым аммонием. Белковая фракция, осаждаемая полуна-сыщенным раствором сернокислого аммония, была названа глобулином. Фракция, осаждаемая насыщенным раствором сернокислого аммония, получила название альбумина. [c.10] Фракционное осаждение белков растворами солей (сернокислым аммонием, хлористым натрием, сернокислым натрием, сернокислым магнием и др.), концентрацию которых постепенно повышают. Лучше фракционировать при 0°С. [c.10] Фракционное осаждение белков метиловым и этиловым спиртами путем повышения их концентрации при низких температурах (—5, — 0=С). [c.10] Фракционное извлечение белков из тканей растворами солей при различных значениях pH. [c.10] Разделение белков путем электрофореза (в аппаратах Тизе-лиуса, электрофореза в крахмальном блоке или на бумаге). [c.10] Разделение белков хроматографическим методом на колонках, заполненных целлюлозой или ионообменными смолами. [c.10] Разделение белков с помощью ультрацентрифугирования. Наибольшее распространение получил метод электрофореза. [c.10] Суть метода состоит в следующем. [c.11] Вернуться к основной статье