ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Ступепчатый синтез олигорибонуклеотидов из "Химия биологически активных природных соединений" Полимеризация мононуклеотидов. Полимеризация мононуклеотидов приводит к гомополинуклеотидам, которые служат объектом для различных химических, ферментативных и физиологических исследований. Впервые метод был разработан на тимидин-5 -фосфате, который является более простым мономером в связи с отсутствием в гетероциклическом основании функциональных групп, подлежащих защите Полимеризация проводилась в присутствии дициклогексилкарбодиимида или других активирующих агентов в среде пиридина. Обычно максимальная длина цепи получаемых олигонуклеотидов достигала 10 мономерных единиц. [c.404] Кроме ТОГО, в процессе полимеризации образуются небольшие количества циклического 3, 5 -фосфата. [c.405] С увеличением степени полимеризации внутримолекулярная циклизация уменьшается вследствие увеличения расстояния между свободными фосфатной и гидроксильной группами цепи. Этот побочный процесс подавляется подбором соответствуюш,ей концентрации мононуклеотида, а также добавлением 25—30% 3 -0-ацетилтимидиы-5 -фосфата, который, располагаясь на конце полинуклеотидной цепи, препятствует циклизации. [c.405] Эффективным является метод фракционирования олигонуклеотидов с помощью различных методов хроматографии. [c.407] Выходы на различных стадиях колеблются от 1 до 11%, однако метод является перспективным и при дальнейшей разработке, по-видимому, может дать хорошие результаты. [c.407] Дополнительная защитная группа должна удаляться в мягких условиях, исключающих разрыв межнуклеотидных связей и миграцию фосфорного остатка от Сз- к Сг. [c.407] При синтезе олигорибонуклеотидов, в отличие от синтеза дезоксирибонуклеотидов, нуклеотидными компонентами, как правило, служат рибонуклеозид-З -фосфаты, так как синтез 2 -защищенных рибонуклеотидов со свободной З -гидроксильной группой очень затруднен. [c.407] По данному методу получено 64 тринуклеотида, содержащих в различной последовательности G, С, U, А. Относительно высокие выходы олигонуклеотидов достигаются при применении избытка мононуклеотидов, вводимых в конденсацию. [c.409] Удлинение олигонуклеотидной цени в нервом случае осуществляется путем селективного удаления 5 -0-ацетильной группировки растущего олигонуклеотида и повторной конденсацией с нуклеотидным компонентом I во втором случае о лигонуклеотидная цепь может наращиваться в двух направлениях первоначально со стороны 5 -гидроксила, а после удаления р-цианэтильного остатка — со стороны З -фосфатной группировки олигонуклеотида. [c.410] Вернуться к основной статье