ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Мартин и Р. Синдж. Аналитическая химия белков (Перевод Г. А. Деборина) из "Химия белка" Осаждение белков различными специфическими оса-дителями является одной из наиболее широко применяющихся операций биохимического анализа, для которой в то же время надежные доказательства немногочисленны. Вероятно, не существует осадителей, полностью отделяющих белки от всех других составных веществ биологической смеси. Многие такие вещества применяются для отделения белков при анализе на некоторые другие составные части смеси. Очевидно, что задачей аналитика является выбрать для белка такой осадитель, который не осаждал бы ничего, кроме белка, или, по крайней мере, не осаждал бы небелковый азот. Было показано, что кислоты, как осадители, удаляют меньше небелкового азота, чем основные реагенты. Наиболее часто применяются трихлоруксусная кислота и реактив Фолина — Ву или их модификации. Из некислотных осадителей наиболее распространены ацетон и спирт. Последние работы со спиртом [196] указывают, что при соответствующем использовании этого вещества можно получить хорошее отделение белков от небелковых веществ. Однако несомненно, что обычные методы введения реактива неудовлетворительны. [c.37] Метафосфорная кислота привлекала меньшее внимание, чем многие другие кислотные осадители белков. Это может частично объясняться нестабильностью реактива, которая делает неопределенным его точный состав [202]. Необходима дальнейшая работа по изучению влияния метафосфорной кислоты на осаждение небелкового азота ввиду ненадежности более ранних работ. Нейберг и Штраус [203] предложили хлорную кислоту, как лучший реактив по сравнению с трихлоруксусной кислотой. Повидимому, еще не была изучена степень осаждения этим реактивом небелковых азотсодержащих соединений. [c.38] Фракционирование белков является слишком большим вопросом, чтобы быть полностью рассмотренным в этой работе, однако некоторые факты здесь вполне ясны. Различие, проводимое между разными классами белков, например между глобулинами и альбуминами. [c.38] Повидимому, аналитик, занимающийся белками, должен считаться с тем фактом, что простое фракционирование с помощью солей является устаревшим и что эта центральная проблема определения белка должна быть разрешена другими методами. То, что проблема разрешима, указывается появлением новых методов разделения, например метода Пиллемера и Хитчинсона [196], которьш удалось разработать простое фракционирование с помощью метилового спирта, согласующееся с электрофоретическим методом с точностью до 5% для фракций глобулина и альбумина нормальной сыворотки и до 5—10%, для патологической сыворотки. Другие работы по спиртовому фракционированию были опубликованы Коном [167] и Тейлором и Кейсом [213]. [c.39] Описание методов анализа белков лучше всего начать с изложения целей анализа. За последние годы исследования в различных областях науки, примыкающих к биохимии, показали физико-химическое своеобразие и однородность белков и многообразие форм проявления их активной и специфической роли в живых организмах. Поэтому было привлечено такое большое внимание к проблеме детального строения белков. Для выяснения этих вопросов точное знание природы и числа аминокислотных остатков, составляющих белки, так же важно, как и знание природы и числа составляющих атомов при изучении структуры более простых молекул. Методы аминокислотного анализа, однако, еще не так надежны, как методы элементарного анализа. Мы попытаемся здесь рассмотреть современное состояние этого вопроса и наметить возможные пути его развития. [c.46] Многие усовершенствования за последнее время, несомненно, были вызваны желанием подтвердить или опровергнуть гипотезу строения белка Бергманна и Нимана в той части, в какой она касалась полного аминокислотного состава. Современные аналитические методы едва ли способны разрешить эту задачу даже для отдельных аминокислот. Однако имеются серьезные основания полагать, что через несколько лет проблема анализа белковых гидролизатов или аминокислот будет разрешена в такой мере, что центр тяжести проблемы будет заключаться в соответствии состава гидролизата составу белка, из которого он получен. [c.46] Необходимо, однако, указать, что многие из методов разделения аминокислот пригодны и для решения более трудных задач разделения пептидов, получающихся при частичном гидролизе белков некоторые из этих методик были разработаны вначале именно с данной целью. Изучение продуктов частичного гидролиза является, повидимому, очень важным для детального выяснения структуры белка [1]. [c.47] Надежные методы аминокислотного анализа необходимы также для агрохимических и клинических исследований, а также для анализа пищевых продуктов. В этих случаях точность иногда может быть принесена в жертву технической быстроте и простоте определений. [c.47] В связи с изучением метаболических процессов при помощи изотопов необходимо располагать методами, позволяющими изолировать каждую аминокислоту с высокой степенью чистоты и из всех видов биологических материалов. Необходимы также специальные методы для контроля чистоты препаратов аминокислот. [c.47] Мы попытаемся рассмотреть успехи, достигнутые в этой области белковой химии за последние 15 лет. Состояние вопроса к началу этого периода превосходно изложено в обзорах Викери и Шмидта [2] (качественная сторона), а также Митчелла и Гамильтона [3] (количественная сторона). [c.47] Приводя чрезвычайно полную библиографию, мы надеялись придать нашему обзору объективный характер, не связанный с нашими личными мнениями и касающийся наиболее интересных и важных направлений прогресса в данной области. [c.47] Блок и Боллинг [За] опубликовали недавно монографию, в которой содержится описание многих методов, а также данные об аминокислотном анализе белков, главным образом с точки зрения вопросов питания. Их рабсига во многих отношениях дополняет настоящий обзор, в котором мы попытаемся дать критическое обсуждение методов, при помощи которых мы можем надеяться получить точные данные об аминокислотном составе индивидуальных белков. [c.47] Вернуться к основной статье