ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Методы трансформации растительных клеток из "Сельскохозяйственная биотехнология Изд2" КИМ выходом полученных трансгенных растений (10—60 %, в зависимости от вида растения). [c.60] Сходным образом трансформируют протопласты, однако такого рода трансформация значительно менее эффективна из-за низкой способности к регенерации самих протопластов. [c.60] Методом кокультивации с агробактериями к настоящему времени получены трансгенные растения практически всех сельскохозяйственных двудольных растений. Этот метод применим также и для некоторых однодольных (пшеница, кукуруза, рис). [c.60] Микроинъекции ДНК. В ряде экспериментов было показано, что метод микроинъекций может успешно применяться для трансформации растительных клеток аналогично микроинъекциям в животные клетки. Это стало возможным после преодоления ряда технических трудностей, в частности, разработки метода получения протопластов для инъекций путем прикрепления их к стеклам полилизином. [c.61] Трансформация растительных протопластов происходит с эффективностью не более 10—15 %, независимо от типа вектора, и подходит как для двудольных, так и для однодольных растений. [c.61] Электропорация. Этот метод основан на том, что импульсы высокого напряжения обратимо увеличивают проницаемость биомембран. Для растительных протопластов процедура электропорации оказалась очень эффективной. Метод состоит в следующем на растительные протопласты, находящиеся в растворе большой концентрации, содержащем ДНК-векторы, действуют высоковольтным импульсом (напряжение 200—350 В, длительность импульса 54 мс). В результате молекулы ДНК поглощаются клетками через поры в клеточной мембране. После разведения раствора протопласты высеваются на соответствующую среду для регенерации. Эффективность переноса определяется через 24—48 ч после электрошока. [c.61] Упаковка в липосомы. Это один из методов, используемых для защиты экзогенного генетического материала, который вводится в протопласты растений, от действия нуклеаз, которые разрушают нуклеиновые кислоты. [c.61] Липосомы — это сферические образования, оболочки которых состоят из фосфолипидов. Их можно получить в результате резкого встряхивания или обработки ультразвуком водных эмульсий фосфолипидов. С помощью липосом в протопласты растений были введены РНК вируса табачной мозаики, ДНК Ti-плазмиды А. tumefa iens, а также целые метафаз-ные хромосомы. К преимуществам систем переноса с помощью липосом можно отнести их низкую токсичность по отношению к клеткам и возможность использования на множестве растений, клетки которых способны утилизировать липосомы. В настоящее время этот способ трансформации применяется все реже из-за его технической сложности и низкой трансформирующей активности (0,5—1 %). [c.62] Метод биобаллистической трансформации. Метод биобаллистики, являясь одним из самых эффективных на сегодняшний день методов трансформации однодольных, может также с успехом применяться на двудольных (рис. 2.4, а). В качестве исходного материала для трансформации берется суспензионная культура, каллусная ткань или культивируемые незрелые зародыши однодольных. [c.62] Вернуться к основной статье