ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Разделение аминокислот методом тонкослойной хроматографии из "Практикум по аналитической химии и физико-химическим методам анализа" Цель работы познакомиться с разделением аминокислот методом тонкослойной хроматографии с последующей идентификацией их с помощью проявителя. [c.141] Сущность работы смесь аминокислот можно разделить, используя силикагель (сорбент) и смесь н-бутилового и н-пропилового спиртов с водой (растворитель). В качестве камеры, в которой проводят разделение, применяют мелкий стеклянный кристаллизатор с притертой крышкой (рис. VI.23). Растворитель наливают непосредственно в камеру или в стеклянную кювету. После окончания процесса хроматографирования проявляют хроматограмму с помощью раствора нингидрина (рис. [c.141] Образовавшееся соединение благодаря наличию сопряженных двойных связей окрашено в интенсивный сине-фиолетовый цвет. [c.142] Приборы и реактивы пластинки с силикагелем (толщина слоя 0,5 мм) камера с пришлифованной крышкой кювета пипетка пульверизатор фильтровальная бумага растворитель (бутанол-1, уксусная кислота, вода в соотношении 4 1 5 по объему или бутанол-1, пропанол-1, вода в соотношении 12 5 3 по объему) 0,2 %-ный раствор нингидрина в ацетоне растворы индивидуальных аминокислот раствор смеси аминокислот (по указанию преподавателя). [c.142] При использовании в качестве растворителя смеси бутанола-1, уксусной кислоты и воды компоненты сначала смешивают в указанном соотношении непосредственно перед употреблением, а после расслаивания применяют верхний слой жидкости. [c.142] Верхний слой — н-бутанол, уксусная кислота, вода (47 13 40) наливают в качестве подвижной фазы в кювету и помещают в камеру для хроматографирования. Пластину с нанесенными на нее пробой и свидетелями помещают в кювету таким образом, чтобы пластинка была погружена в растворитель не более чем на 5 мм. Растворитель не должен касаться стартовой линии. Для насыщения камеры парами растворителя на задней стенке камеры прикрепляется смоченный растворителем лист фильтровальной бумаги, доходящий до дна кюветы. [c.143] Через 3 ч процесс хроматографирования заканчивают. Хроматограмму высушивают и затем для локализации анализируемых аминокислот проявляют, опрыскивая из пульверизатора, раствором нингидрина в ацетоне. Аминокислоты обнаруживаются в виде синих пятен. [c.143] Для количественного определения содержания аминокислот в анализируемой смеси строится калибровочная кривая зависимости площади пятна (мм ) от количества аминокислоты (г), используемой в качестве свидетеля . Между количеством аминокислоты и площадью пятна на пластинке должна существовать зависимость, выражаемая прямой, выходящей из начала координат. [c.143] Для построения калибровочного графика использована зависимость площади пятна от концентрации аминоуксусной кислоты. Навеску массой 1,008 г растворили в мерной колбе вместимостью 100 мл. Затем 0,01 мл раствора хроматографировали методом ТСХ и получили пятно площадью 18,6 мм Определите массовую долю аминоуксусной кислоты в анализируемой навеске. [c.144] Вернуться к основной статье