ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Техника разделения из "Белки Том 1" Природные пептиды часто в той или иной степени принадлежат к семействам, различные компоненты которых обладают родственной структурой и сходным поведением. Напротив, в продуктах неполного гидролиза белков содержится исключительно сложная смесь пептидов, вследствие чего выделение химически чистого пептида представляет собой длительную и требующую большой точности операцию, которую, несмотря на связанные с ней трудности , следует все же безоговорочно предпочесть применению собственно аналитических методов . [c.149] Историю развития методов выделения пептидов можно подразделить на два периода. [c.149] Хроматографическое разделение пептидов было рассмотрено в ряде обзоров [329, 353]. Его принципы идентичны с принципами хроматографичеокого разделения аминокислот. [c.151] Другим чрезвычайно интересным применением ионообменных смол является метод молекулярных сит , используемый для отдеаения больших молекул белков или пептидов от меньших молекул пептидов или аминокислот [364]. [c.152] Фронтальный анализ недавно был применен для изучения продуктов гидролиза яичного альбумина пепсином [367]. Однако его разрешающая способность невелика, так как в указанном случае обнаруживается только пять фронтов. Этот метод, безусловно, не в состоянии обеспечить истинное разделение, за исключением разделения группы пептидов, образующих первый фронт. Четкое разделение при элюировании зависит в основном от характера упоминавшейся выше (стр. 138) функции f( ). В идеальном случае отношение f( )/ ие зависит от величины с. Следовательно, величина RF также яе зависит от с, и данное вещество перемещается вдоль молоти с одной и той же скоростью независимо от концентрации. Однако обычно отношение f( )/ увеличивается при уменьшении с. Это обстоятельство сопряжено с большими неудобствами, так как концентрация у отступающего края данной зоны становится меньше, чем у наступающего края. Поэтому отступающий край зоны движется медленнее и зона постепенно приобретает диффузный хвост . Такое образование размытого хвоста серьезно осложняет разделение. Оно играет особенно большую роль в случае активированного угля, который дает сильно изогнутые изотермы адсорбции. [c.153] В целом адсорбционная хроматография в настоящее время, повидимому, особенно применима для предварительного фракционирования белковых гидролизатов. Выделенные таким образом группы можно затем более подробно исследовать с помощью распределительной. или ионообменной хроматографии. Следует, кроме того, отметить, что адсорбционная хроматография довольно успешно применялась в работах с природными полипептидами (тироцидином) [370]. [c.154] Все описанные до сих пар хроматаграфические. методы вначале испытывались на смесях аминокислот, а затем уже применялись для разделения пептидов. Другой /аспект этой проблемы — распространение на пептиды тех методов, которые начинают оправдывать себя в хроматографии белков, — до сих пор еще мало изучен. Разрешение этой задачи, возможно, позволит осуществить хроматографическое разделение крупных пептидов, которое в настоящее время производится с мало удовлетворительными результатами. [c.156] В конце этого краткого обзора следует отметить, что растворы аминокислот и пептидов перед хроматографированием часто бывает необходимо обессоливать. Такое обеосоливание в течение многих лет осуществляли в электролизерах с циркулирующим ртутным катодам [372]. Этот весьма остроумный, метод все же не является -вполне совершенным. В частности, применение его приводит к превращению аргинина в орнитин [3816]. Другой простой метод состоит в поглощении минеральных ионов с помощью ионообменных смол [381в]. [c.156] Вернуться к основной статье