ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Разрушение клеток и экстрагирование белков из "Белки Том 1" Для того чтобы выделить белки из клеток, необходимо вначале разрушить клеточные оболочки. Для этого применялся ряд методов, но ни один из них не является универсальным, поскольку устойчивость клеточных оболочек совершенно различна. [c.12] Для того чтобы сделать возможным экстрагирование более растворимых белков, многие животные и растительные ткани соответствующим образом измельчают. Мышцы животных бывает достаточно размельчить в обычной мясорубке. Более тонкое измельчение может быть осуществлено при помощи мясорубки Латапи, мешалки Варинга или гомогенизатора . При выделении растворимых ферментов слишком тонкое измельчение часто оказывается нежелательным, так как оно нередко затрудняет отделение индивидуального вещества и усиливает деструктивное действие ферментов. Ткани часто измельчают и растирают после предварительного замораживания сухим льдом [49]. [c.13] Преимуществом метода является отделение липидов и получение белка в чистом виде. Имеется некоторое количество сравнительных данных об общих выходах белка ли о выходах индивидуальных ферментов, выделенных по описанному выше методу или при помощи экстрагирования свежих тканей. [c.14] Выбор подходящего растворителя зависит, конечно, от растворимости выделяемых белков (см. стр. 41). Часто рекомендовали производить последовательное экстрагирование, применяя различные растворители и переходя от более избирательных растворителей к более общим [9а]. Метод последовательного экстрагирования часто использовали при выделении белков семян (см. книгу Осборна [32]), а также при работе с многими другими системами его следует, повидимому, применять во всех возможных случаях. Недавно Кон и его сотрудники [51] вновь отметили достоинства этого метода. Они описали новый метод фракционирования плазмы крови и других систем, согласно которому большинство белков сначала осаждают, а затем осадок последовательно экстрагируют различными растворителями. Большим преимуществом этого метода является то, что при правильно выбранном способе экстрагирования уже на ранних стадиях разделения лабильные субстраты могут быть отделены от действующих на них ферментов. [c.14] При экстрагировании цельной ткани белки могут быть отделены от каждого из структурных элементов, входящих в состав клетки. Предварительное отделение структурных элементов облегчает выделение и идентификацию каждого из компонентов. Описан ряд методов, пригодных для отделения в относительно неизмененном состоянии ядер и митохондрий от других составных частей клетки. Шнейдер и Хогебум [52] опубликовали недавно обзор методов, применяемых в этой области, и достигнутых при их помощи результатов. До сих пор количество выделенных фракций клеток, естественно, было мало. Перри [53] получил неизмененные миофибрилы, обрабатывая срезы мышц коллагеназой. Оболочки клеток бактерий [40] и тени [2] эритроцитов были разделены после разрушения клеток. [c.14] Предварительная обработка тканей или их составных частей приводит к удалению или разрушению посторонних мешающих компонентов, что облегчает выделение белка. Мортон [54] сообщил, что после предварительной обработки -бутиловым спиртом можно экстрагировать водными растворителями ряд ферментов, которые до сих пор считались связанными с нерастворимыми частицами , например такими, как митохондрии. Метод, повиди- мому, основан на удалении фосфолипидов. Результаты обработки отмытых мышечных остатков этиловым спиртом и эфиром перед выделением тропомиозина [55] или ацетоном, хлороформом и бутиловым спиртом перед выделением актина [56, 57] объясняют частичным отделением липидов, а также денатурацией других белков. [c.15] Вернуться к основной статье