ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Определение формальдегида в биологических субстратах из "Превращения и определение промышленных органических ядов в организме" При отгонке формальдегида из биосред последние следует разбавить 3—5-кратным объемом дистиллированной воды и продолжать перегонку до тех пор, пока в приемнике не соберется по крайней мере 60% дистиллята от общего количества, подвергаемого перегонке. [c.153] Качественные реакции на формальдегид. Из многочисленных реакций на формальдегид мы опишем только три, проверенные нами. Четвертая описана в разделе об определении ацетальде-гида на стр. 169. [c.153] Для избавления от полярографических волн кислорода лучше всего вести анализ на полярографе с компенсацией, величина которой при всех анализах должна быть постоянной. [c.154] Одновременно и независимо в той же пробе можно определить количество ацетальдегида. При указанных условиях потенциал полуволны ацетальдегида составляет —1,74 в и, таким образом, волны этих альдегидов хорошо разделяются. Понятно, высоту волны ацетальдегида следует отсчитывать от уровня высоты волны формальдегида. Чувствительность определения формальдегида и ацетальдегида составляет менее 3 мкг в 1 мл дистиллята. [c.154] Принцип. Исследуемый образец освобождают от белков. Из безбелкового фильтрата отгоняют муравьиную кислоту путем вакуумной дистилляции при пониженной температуре. Восстанавливают кислоту до формальдегида при взаимодействии ее с магнием формальдегид определяют по специфической его реакции с хромотроповой кислотой. [c.154] Реактивы. 1. Концентрированная соляная кислота. [c.154] Отгонка кислоты из образца. 0,5—1 мл исследуемой крови смешивают с двумя объемами раствора для осаждения белков. Смесь центрифугируют отгонку кислоты ведут из центрифугата в специальном приборе, который может быть изготовлен в любой стеклодувной мастерской. Прибор состоит из колбы а, емкостью 50 мл, и пробирки б, размерами 25X150 мм (рис. 11). [c.154] Центрифугат вносят в колбу а посредством изогнутой пипетки. Отверстие в закрывают резиновой пробкой, смазанной вакуумной замазкой. В пробке имеется отверстие, перекрываемое стеклянным краном н связанное с вакуумным насосом. Колбу а помещают в сухой лед с таким расчетом, чтобы пробирка б находилась в горизонтальном положении. Сухой лед при этом удобно держать в шнрокогорлом термосе. [c.155] Когда содержимое колбы замерзнет, произодят откачивание воздуха форвакуумным насосом (достаточно 1 мин работы насоса), перекрывают кран и отключают насос. Переворачивают прибор таким образом, что колба а теперь находится в воздухе, а пробирка б — во льду. [c.155] С этого момента и начинается перегонка идет она без нагревания, автоматически и должна быть проведена до конца. Дистиллят скапливается на дне пробирки б. Скорость перегонки составляет 0,5—1 мл в час. [c.155] Если в образце имеются растворенные газы, которые мешают определению, то их можно ликвидировать повторной откачкой сосуда после оттаивания и вторичного замораживания образца. При проведении такой двойной откачки в случае крови скорость перегонки увеличивается в среднем на 25%. Дегазирование крови облегчается в присутствии небольшой капли ксилола. [c.155] Ход анализа. Для анализа используют 0,5 мл дистиллята, содержащего не более чем 15 мкг муравьиной кислоты. Если это требование не выполнено, что станет видно по результатам анализа, дистиллят следует разбавить дистиллированной водой в соответствующее количество раз. [c.155] Анализируемый дистиллят вносят в пробирку, погруженную в ледяную баню и содержащую магниевую спираль. Добавляют 0,5 мл соляной кислоты, но не сразу, а в 10 приемов порциями по 0,05 мл с интервалами не менее чем 1 мин между каждой порцией. Убирают пробирку с ледяной бани через 1 мин после добавления последней порции и вносят в нее 1,5 мл хромоген-ного реактива. Нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Следует принять меры против конденсации паров воды из бани в пробирке. Для этого достаточно на пробирку несколько ниже ее открытого конца надеть манжетку из ткани или бумаги. По окончании нагревания пробирку охлаждают и центрифугируют. [c.155] Концентрацию муравьиной кислоты в дистилляте определяют по градуировочному графику. При расчете содержания муравьиной кислоты в исходном биосубстрате следует принять во внимание величину исходного образца, обший объем дистиллята и разбавление, если в нем была необходимость. [c.156] Чувствительность определения — 0,25 мкг муравьиной кислоты в 0,5 мл дистиллята со средней ошибкой 0,13 мкг. [c.156] Построение градуировочного графика. Готовят серию стандартных растворов, содержаших в 0,5 мл 0,01 н. соляной кислоты от О до 15 мкг муравьиной кислоты. Каждый из этих растворов подвергают анализу точно так, как это описано выше. По полученным результатам строят график. [c.156] Если конечный фотометрируемый раствор разбавляют дистиллированной водой незначительно (или совсем не разбавляют), график линеен до 10 мкг с последующим незначительным загибом. Выше 15 мкг загиб становится достаточно большим и точность определения резко снижается. [c.156] Некоторые замечания. В указанной процедуре восстановление муравьиной кислоты до формальдегида не количественное и составляет только примерно 30% от него. Поэтому весьма существенно проведение всех анализов в одних и тех же условиях. [c.156] Если в анализируемом образце содержится формальдегид, можно предварительно оценить его количество и вычесть из результатов, которые будут отражать сумму муравьиной кислоты и формальдегида. Однако более целесообразно связать его в образце. [c.156] Для этого к безбелковому центрифугату образца перед перегонкой добавляют солянокислый фенилгидразин из расчета 5—10 мг на 1 мл центрифугата. При концентрации формальдегида до 10 мкг/мл достаточно 5 мин при комнатной температуре для завершения реакции с фенилгидразином и полного связывания формальдегида, после чего можно начинать дистилляцию. Кроме того, формальдегид, по-видимому, может быть убран из образца методом повторного замораживания и откачки, как описано выше. Это предположение нами не проверялось и требует экспериментального подтверждения. [c.156] Вернуться к основной статье