ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Изготовление набивных колонок из "Газовая хроматография в биохимии" После выбора неподвижной фазы и твердого носителя необходимо при изготовлении набивных колонок рассмотреть ряд других параметров, вклюг чающих отношение неподвижная жидкость — твердый носитель, длину, диаметр и материал колонки. Кроме того, неподвижную жидкость следует наносить на твердый носитель равномерно и засыпать порошок в колонку плотно, избегая каналов в подвижной фазе. Затем колонку выгибают, придавая ей нужную форму, и устанавливают в хроматограф с помощью герметичных соединений. Перед проведением анализа часто требуется подвергнуть колонку тренировке. [c.45] Иногда предпочитают отказаться от меньших удерживаемых объемов, получаемых с малыми отношениями твердое тело — носитель, чтобы работать при низких рабочих температурах колонки. При этом часто получают весьма хорошие результаты. Так, хорошее разделение пиков было достигнуто при хроматографическом анализе смесей moho-, ди- и триэтиленгликолей на карбоваксе 1000 при отношении жидкость — твердое тело 40 100 и температуре 180° [119]. Когда отношение было уменьшено до 12 100, пики не разделялись вследствие быстрого элюирования компонентов из колонки. Однако после понижения температуры до 150° были получены острые пики и достигнуто хорошее разделение при отношении жидкость — твердый носитель 12 100. Такой принцип применили Хишта и др. [65] для хроматографического анализа твердых органических соединений при температурах на несколько сотен градусов ниже их точек кипения. Используют стеклянные шарики с низкой адсорбционной способностью, а отношение жидкость — твердый носитель уменьшают до нескольких десятых долей процента. При этом, конечно, необходимо вводить малые пробы и работать с соответственно более чувствительными детекторами. [c.47] В большинстве случаев достаточна колонка длиной 1—2 м. Число теоретических тарелок увеличивается с длиной колонки, и поэтому при разделении веществ с малыми коэффициентами разделения нередко применяют колонки длиной 10—20 м. Некоторые набивные колонки могут иметь эффективность до 3000 теоретических тарелок На 1 ж, но в других случаях она не превосходит 200, в особенности при применении твердых носителей с низкой удельной поверхностью. Скотт [125] на колонке длиной 15,3 м с высоким давлением на входе получил эффективность, соответствующую 18 ООО—30 ООО теоретических тарелок. Для количественного анализа используют колонки с внутренним диаметром 0,2—2 см, причем наиболее часто с диаметром 0,4—0,6 см. Эффективность колонок для ГЖХ при увеличении их диаметра падает незначительно. Димбат и др. [39] описали случай, когда увеличение длины колонки менее чем на 50% компенсировало потерю эффективности при увеличении диаметра на 600%. [c.47] Колонки готовят из стекла, нержавеющей стали или меди. Выбор материала имеет большое значение, поскольку неустойчивые вещества могут каталитически реагировать или изомеризоваться на стенках колонки. Это часто приводит к осложнениям, в особенности при анализе терпенов. Следует также уделить внимание форме колонки. Колонки наиболее эффективны при первоначальном заполнении прямой трубки, которой затем придают необходимую форму. Поэтому стекло не является удачным материалом, если в хроматографе не предусмотрены прямые колонки. Иногда ряд стеклянных трубок набивают отдельно и соединяют последовательно и-образными переходами. Однако лучше делать спиральные колонки из металла. [c.47] Обычно предпочитают прямые или и-образные трубки при наличии соответствующего термостата для колонок. При длине колонок 5 м я более их следует навивать на оправку в виде спирали, после чего можно помещать в термостат. [c.47] Колонки в виде спирали обладают несколько меньшей эффективностью в расчете на единицу длины, чем прямые, но это не имеет большого значения для аналитических колонок с в.нутренним диаметром 0,5 сж, если диаметр спирали равен 15 см и более. Если же внутренний диаметр равен 8 см, а радиус спирали — около 40 см, то потеря разделительной способности будет значительной [49]. [c.48] Неподвижную жидкость обычно растворяют в органическом растворителе, например дихлорметане, ацетоне или этилацетате, и смешивают с твердым носителем в большой выпарной чашке. Для удаления растворителя раствор нагревают при помешивании. При наличии соответствующего оборудования удобнее смешивать твердое вещество с раствором неподвижной фазы в круглодонной колбе и удалять растворитель во вращающемся вакуумном испарителе. Порошок до набивки колонки должен быть сухим наощупь и свободно продуваться. Ниже приведено несколько типичных методов приготовления набивки. [c.48] Колонку не досыпают доверху на 1 см, затыкают тампоном из стеклянной ваты и изгибают, придавая желаемую форму, или навивают на оправку. В первом случае очень удобно использовать специальную оправку (фирмы The Imperial Brass Mfg. o. ). Подсоединение к хроматографу осуществляют обычно с помощью винтов с барашками, уплотненных силиконовыми прокладками,, или фитингов. [c.49] Колонки подвергают тренировке, пропуская через них подвижную фазу при максимальной или слегка пониженной рабочей температуре. Точные условия тренировки зависят от термической устойчивости набивки и чувствительности детектора. Обычно достаточна обработка в течение 1—3 суток. При необходимости применения (в сочетании с ионизационным детектором) нескольких колонок удобно иметь сменные колонки, непрерывно подвергаемые тренировке в специально для этого созданном приборе, так как в противном случае потребуется много времени для понижения фона детектора до необходимого для работы уровня. [c.49] Вернуться к основной статье