ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Проведение ферментаций из "Микробиологические трансформации стероидов" Описанные аппараты служат для периодического процесса трансформации в последнее время в литературе появились описания аппаратов для проведения непрерывной ферментации в лабораторном [44] или полупромышленном масштабе [45—47 ]. В промышленности непрерывные методы трансформации стероидов пока не используются, поскольку в этом случае существует большая опасность заражения, чем при периодическом процессе (в последнем случае при заражении может быть забракована лишь одна порция продукта). [c.47] В состав питательной среды должны входить источники углерода и азота, а также витамины и минеральные вещества. Источниками углерода и азота обычно служат углеводы, гидролизаты белков или мясные экстракты потребность в витаминах может быть удовлетворена экстрактами дрожжей или печени. В промышленности для этой цели применяются более дешевые материалы патока, барда, соевая мука или кукурузный экстракт. Минеральные вещества обычно добавляются в виде неорганических солей. [c.47] Среди методов контроля за ходом ферментации и анализа ее продуктов первое место, несомненно, принадлежит различньси видам хроматографии. Наиболее разработан в применении к стероидам метод хроматографии на бумаге [60—63]. Ценность этого метода особенно очевидна при первичном испытании культур на способность к трансформации стероидных субстратов. В то же время сравнительная медленность определения состава смеси этим методом (обычно несколько часов) монсет привести к тому, что результаты анализа станут известны уже после окончания ферментации. Поэтому для текущего анализа продуктов реакции пользуются либо ускоренными методами хроматографии на бумаге [64], либо хроматографией в тонком слое адсорбента [65] в последнем случае анализ занимает всего 20—30 мин. Некоторое применение нашла также газожидкостная хроматография [66], позволяющая непосредственно получить количественную характеристику состава смеси продуктов реакции. [c.48] Помимо наиболее универсальных хроматографических методов контроля, сравнительно широко используются также спектрофотометрические методы, иногда в сочетании с цветными реакциями, которые разрабатываются отдельно для каждого процесса. Например, метод анализа пред-низолона в смеси с кортизолом основан на образовании окрашенных комплексов с серной кислотой и этанолом и спектрофотометрическом определении концентрации комплекса преднизолона при 560 m i (в этой области комплекс кортизола оптически прозрачен) [67]. Аналогичные методы разработаны для определения андростадиен-1,4-диона-3,17 в смеси с прогестероном [68] и ряда других смесей [69—75]. [c.48] Менее распространен метод адсорбционного выделения продуктов реакции. По этому методу к культуральной жидкости добавляют активированный уголь или ионообменную смолу, которые количественно адсорбируют стероиды. После отделения адсорбента продукты реакции вымываются из него подходящими растворителями [76—78]. В отдельных случаях нашли применение и другие методы выделения. Например, преднизолон, полученный из кортизола ферментацией с Arthroba ter simplex [79], был выделен из реакционной смеси высаливанием культуральной жидкости фосфатом или сульфатом аммония с последующей кристаллизацией. [c.49] Неоднозначность микробиологических трансформаций стероидов ставит задачу разделения и очистки выделенных продуктов реакции. Эта задача обычно решается путем кристаллизации, хроматографирования или противоточного распределения. В случае превращения прогестерона в андростадиен-1,4-дион-3,17 [80] очистка была достигнута путем образования легко кристаллизующегося молекулярного комплекса стероида с а- или р-нафтолом. После очистки комплекса нафтол удалялся промывкой 0,5%-ным раствором NaOH. [c.49] Вернуться к основной статье