ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Типы микробиологических трансформаций и характер ферментов из "Микробиологические трансформации стероидов" Большинство трансформирующих стероиды ферментов является индуцированным, поскольку в присутствии соответствующих субстратов их активность увеличивается во много раз. Однако во многих случаях культуры микроорганизмов содержат небольшие количества конститутивных ферментов, порядка 1—5% от максимальной активности в при-ч утствии индуктора. Исследование индуцирующей активности различных ч5тероидов показало, в согласии с данными по другим типам ферментов [185], что эта активность не связана с возможностью трансформации данного соединения индуцируемым ферментом. [c.26] Кинетика действия этой группы ферментов изучена лишь на примерах За- и Зр,17р-оксистероид-дегидрогеназ (гл. III). Характер кинетических закономерностей согласуется с литературными данными для ферментов соответственно с одним и двумя реакционными центрами [185]. Влияние pH на кинетику также мало изучено в основном приводятся лишь кривые pH — активность. В случае обратимых реакций, катализируемых оксистероид-дегидрогеназами, Н входит в уравнение реакции, и поэтому константа скорости является линейной функцией pH. Для стероид-дегидрогеназ оптимальна щелочная среда (pH 8—9), для стероид-гидроксилаз—нейтральная или слабокислая среда (pH 5,5—7,0), а для стероид-изомеразы скорость приблизительно постоянна при pH 6—9. С другой стороны, влияние кофакторов и ингибиторов изучено весьма подробно, поскольку оно позволяет получить сведения о природе простетической группировки. [c.27] Изучение специфичности действия ферментов по отношению к субстрату позволило выявить центры молекулы стероида, наиболее суп1,ественно сказывающиеся на степени связывания, и тем самым пролить свет на механизм фермент-субстратного взаимодействия. При этом оказалось, что все трансформирующие стероиды ферменты, за исключением гидролитических (Р-глюкозидаза, р-глюкуронидаза, эстераза), специфичны по отношению к стероидам как классу соединений, и лишь в некоторых случаях с небольшой скоростью трансформируют другие соединения. Все эти ферменты имеют абсолютную специфичность по отношению к природным энантио,-мерам стероидных соединений, что уже нашло применение для расщепления рацематов. Изучение специфичности по отношению к субстрату наряду с другими данными позволяет также сделать вывод об индивидуальности ферментов каждого микроорганизма и отличии их от соответствующих ферментов из тканей млекопитающих (см. гл. II). [c.28] Связывание высокоспецифичных ферментов со стероидными субстратами, имеющими большое число функциональных групп, расположенных на определенном расстоянии друг от друга, должно происходить сразу в нескольких местах. Это было показано на модельном примере ферментативного восстановления бициклических кетонов (гл. III). Наиболее существенную роль в процессе связывания стероидов с ферментами, повидимому, играет менее затрудненная (более плоская) а-сторона стероидной молекулы. [c.28] При сравнении химических и ферментативных реакций в области стероидов можно отметить некоторые различия. Прежде всего химическая активация реагирующей связи, т. е. аллильное положение к двойной С=С-связи или вицинальное положение к карбонильной группе, по-видимому, имеет второстепенное значение при микробиологических трансформациях. Поскольку связывание стероида с с ерментом происходит одновременно в нескольких точках, протекание реакции может в первук очередь определяться стереохимией всей стероидной молекулы, а не только конкретной реагирующей группировки. Поэтому к оценке специфичности ферментативных реакций лишь в очень немногих случаях можно подойти с обычными химическими критериями. Те положения стероидного скелета, которые являются наиболее реакционноспособными для атаки химических реагентов, могут быть недоступны для атаки фермента и наоборот. [c.28] Вернуться к основной статье