ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Аминокислоты из "Хроматографических анализ" Адсорбционная способность аминокислот на большинстве адсорбентов зависит от величины pH раствора. Некоторые специальные сорбенты (например, зеокарб-215) имеют очень большую избирательную способность по отношению к ним. Так, глутаминовая кислота при рН=3,2 адсорбируется сильно, а гистидин слабо. Но при рН = 10 гистидин сильно адсорбируется. [c.153] Хроматографической адсорбцией на колонке из окиси алюминия из печени рыб была выделена пантотеновая кислота, имеющая формулу Hu H. ( H3)2 H(OH) ONH H2 H2 OH. Колонка предварительно промывалась соляной кислотой и pH поддерживался около 8,5 пантотеновая кислота адсорбируется в нижней части колонки и выделяется промыванием раствором гидрата окиси бария. [c.153] Обработанная соляной кислотой окись алюминия при правильном подборе pH водного раствора полностью адсорбирует кислые аминокислоты, не адсорбируя нейтральные и основные . [c.154] Разделение аминокислот, принадлежащих к одной группе, достигается молекулярной адсорбцией на активированном угле и ионообменной адсорбцией на окиси алюминия или активных землях. В молекулярной хроматографии для этой цели применяют растворители с возрастающей полярностью, а в ионообменной— водные или водно спиртовые растворы с возрастающей концентрацией ионов водорода. [c.154] Турба разработал подробную схему разделения нейтральных аминокислот. На колонке из окиси алюминия адсорбируется цистин, а все остальные аминокислоты удаляются водно-спиртовой смесью, подкисленной уксусной кислотой. Добавление формальдегида позволяет отделить серии и глицин на колонке из окиси алюминия, обработанной соляной кислотой. Удаляя из фильтрата формальдегид и доводя pH раствора до 5,5, адсорбируют аланин и пролин на колонке из флоридина. В растворе остаются лейцин, валин и метионин, которые разделяют на активированном угле. [c.154] Комбинированное разделение аминокислот на группы достигается последовательным пропусканием белкового гидролизата через колонки из активированного угля, задерживающего ароматические кислоты, вофатита С с карбоксильной катионообменивающей группой, задерживающего основные аминокислоты, вофатита КЗ с катионообменной сульфогруппой, адсорбирующей нейтральные и кислые аминокислоты, и амберлита ЛН-4 с анионообменной аминогруппой из смеси нейтральных и кислых аминокислот, удерживающего только кислые аминокислоты. [c.154] Для разделения аминокислот Тизелиус разработал метод адсорбционного анализа с применением в качестве сорбента активного угля. Раствор продавливается через слой адсорбента, и получается жидкостная хроматограмма, состав которой определяется по разнице в коэффициенте лучепреломления. Этим способом были разделены смеси равных частей лейцина, валина и аланина. Таким же образом были разделены продукты расщепления казеина трипсином. Концентрация определялась при помощи микроинтерферометра. [c.154] Таким образом, в 25 мг гидролизата протеина были обнаружены 8 аминокислот фенилаланин, лейцин, изолейцин, валин, метионин, пролин, тирозин и аланин. Анализ искусственной смеси этих же аминокислот показал, что заданное содержание может отличаться от полученных результатов не более чем на 5%. [c.156] Разделение различных смесей аминокислот легко осуществить методом хроматографии на бумаге в условиях, обеспечивающих насыщение водяным паром окружающего бумагу пространства. Происшедшее разделение непосредственно незаметно, но может быть обнаружено при опрыскивании из пульверизатора высушенной бумаги 0,1 %-ным раствором реактива на аминокислоты нингидрина (трикетогидриндена) в бутиловом спирте и последующим нагреванием бумаги. [c.156] Расположение аминокислот на бумаге после обработки нин-гидрином обнаруживается в виде отдельных окрашенных пятен. Скорость перемещения аминокислот на бумаге может быть выражена через весовое количество воды и растворителя на бумаге и через коэ4 фициент распределения соответствующей аминокислоты. Для этой цели удобно пользоваться полосками бумаги, подвешенными к лотку, содержащему растворитель, насыщенный водой. Прибор помещают в закрытый сосуд, воздух внутри которого насыщен парами воды и растворителя. Так были найдены отношения скорости перемещения полосы данной аминокислоты к скорости движения фронта жидкости для 23 различных аминокислот. Отсюда могут быть вычислены коэффициенты распределения. [c.156] Индивидуальные аминокислоты на хроматограмме можно обнаруживать при их содержании в смеси от 2 до 0,5y. [c.157] Вопрос о содержании норлейцина в гидролизате спинного мозга был решен сравнением индивидуальных хроматограмм гидролизата, норлейцина и их смеси. В качестве растворителя брался бензиловый спирт. В индивидуальной хроматограмме гидролизата норлейцин обнаружен не был. В хроматограмме искусственной смеси гидролизата и норлейцина последний может быть обнаружен, если его введено не менее 0,5 мг на 1,2 мг гидролизата. Таким образом, исследование хроматограмм позволяет утверждать, что не больше 0,03% всего азота входит в норлейцин гидролизата. [c.157] Для хроматографии аминокислот на бумаге применяют специально обработанную фильтровальную бумагу, а также прорезиненную фильтровальную бумагу, в которой набухший каучук играет роль неподвижного растворителя . [c.157] При способе электрофореза берут широкую бумажную полосу,, предварительно обработанную фосфатным буферным раствором на один ее конец, на некотором расстоянии от края, помещают каплю анализируемой смеси. Полоску опускают другим концом в растворитель, продев вдоль вертикальных краев ее проволочные электроды, соединенные с источником тока. Ионы аминокислот передвигаются в зависимости от заряда к аноду или к катоду, а незаряженные частицы передвигаются по вертикали, не отклоняясь. [c.158] Для распределительной хроматографии на бумаге рекомендуются в качестве растворителей фенол, нормальный бутиловый спирт, амиловый спирт, бензиловый спирт, креозол, изомасляная кислота, пиридин, хинолин. Чаще всего применяют фенол или нормальный бутиловый спирт. Иногда употребляются также смеси органических растворителей. Органические растворители предварительно насыщают водой. [c.158] В состав зольных элементов бумаги входят ионы меди, легко образующие комплексные соединения с ионами аминокислот. Хотя количество их и очень невелико, однако образование медного комплекса можно заметить в виде розового выступа впереди пурпурного пятна аминокислоты на бумаге. Образование этих комплексов можно предупредить, добавляя к растворителям вещества, осаждающие ионы меди или образующие с ней более прочные комплексные соединения. В качестве таких веществ были использованы сероводород, цианистый водород, аммиак и специальный реактив на медь, купрон (а-бензоиноксим). Можно также предварительно обработать применяемую для хроматографии бумагу разбавленным раствором K4[Fe N)g]. [c.158] Для идентификации простых пептидов применяются те же методы получения хроматограмм, что и для аминокислот. Простые пептиды наиболее целесообразно вымывать из хроматограмм, затем дезаминировать их, подвергать гидролизу и, наконец, идентифицировать полученные продукты повторным хроматографированием. Для этого готовят параллельно две двухмерные хроматограммы, из которых одну обрабатывают нингидрином обычным путем, а вторую тем же нингидрином, разбавленным 1 10. При этом на второй хроматограмме проявляется положение только наиболее интенсивных пятен, остальные же пятна, полученные на первой хроматограмме, можно интерполировать по положению более интенсивных. [c.158] Вернуться к основной статье