ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Спектрофотометрический метод определения зоокумарина в пищевых продуктах животного происхождения из "Анализ ядохимикатов" Зоокумарин изолируют из биоматериала подкисленным этиловым спиртом и диэтиловым эфиром. Вытяжку очищают от примесей методами экстракции и хроматографии на колонке, затем определяют вещество спектрофотометрическим методом (УФ-об-ласть спектра). [c.204] Диатиловый эфир, не содержащий перекисей, хч. [c.204] Этиловый спирт, 95%-ный. [c.204] Этиловый спирт подкисленный. К 1 об. ч. 4 н. серной кислоты прибавляют 9 об. ч. 95%-НОГО этилового спирта. [c.204] Вода подкисленная. К 5 мл 4 п. серной кислоты прибавляют воду до 1 л. [c.204] Сульфат натрия безводный. [c.204] Оксид алюминия для хроматографии. [c.204] Хроматографическая колонка. В стеклянную колонку (длина 25 см, диаметр 1,5 см) вносят небольшой тампон из ваты, закрывают кран и наполняют ее диэтиловым эфиром. В эфирный слой вносят оксид алюминия для хроматографии в таком количестве, чтобы слой сорбента составлял 10—12 см. На оксид алюминия наносят слой безводного сульфата натрия толщиной 10 см. Эфир сливают из колонки, а оксид алюминия и сульфат натрия в колонке еще несколько раз промывают эфиром. При последнем промывании колонки сливают такое количество эфира, чтобы поверхность оставшегося эфира оказалась на уровне слоя сульфата натрия. [c.204] Изолирование и очистка зоокумарина. В фарфоровую ступку вносят 25 г измельченного биоматериала, прибавляют кварцевый песок и смесь интенсивно растирают, прибавляя малыми порциями 75 мл подкисленного спирта. Полученную смесь переносят в склянку с притертой пробкой. Ступку тщательно ополаскивают несколькими порциями диэтилового эфира (всего используют 150 мл эфира) и промывную жидкость переносят в ту же склянку. [c.204] Содержимое склянки взбалтывают 30 мин и фильтруют. Фильтрат собирают в делительную воронку. Остаток исследуемого объекта (в склянке) три раза взбалтывают с эфиром (порции по 25 мл). Эфирные вытяжки присоединяют к основной вытяжке в делительной воронке. В делительную воронку приливают 200 мл подкисленной воды и взбалтывают. Водную фазу сливают в другую делительную воронку, а к эфирному слою в первой делительной воронке еш,е дважды прибавляют подкисленную воду (по lito мл) и взбалтывают. Объединенные водные вытяжки обрабатывают дважды диэтиловым эфиром (порции 75 и 50 мл). Полученные при этом эфирные вытяжки переносят в первую делительную воронку, в которой содержится основная эфирная вытяжка. Эфирную вытяжку переливают в склянку с притертой пробкой, прибавляют безводный сульфат натрия, смесь взбалтывают и фильтруют. Фильтрат сливают в колбу для отгонки жидкостей и отгоняют эфир на водяной бане до тех пор, пока в колбе не останется 20—25 мл жидкости. [c.205] Оставшуюся в колбе жидкость переносят в делительную воронку, колбу ополаскивают эфиром, который тоже сливают в делительную воронку. Затем в делительную воронку прибавляют 20 мл раствора пирофосфата натрия, жидкость взбалтывают и отделяют водную фазу. В делительную воронку вносят еш е 10 мл раствора пирофосфата натрия, взбалтывают, затем отделяют водную фазу. [c.205] Соединенные водные вытяжки вносят в делительную воронку, прибавляют эфир, взбалтывают. Водные вытяжки отрабатывают с новыми порциями эфира до тех пор, пока эфирный слой не перестанет окрашиваться. К водной фазе в делительную воронку прибавляют 4н. серную кислоту до pH=4, затем 20 мл эфира взбалтывают и отделяют вытяжку. Подкисленную водную фазу обрабатывают новыми порциями эфира (по 15 мл) еще два раза. [c.205] Эфирные вытяжки соединяют и фильтруют через слой безводного сульфата натрия. Эфирный фильтрат пропускают через хроматографическую колонку. Колонку промывают 25 мл диэтилового эфира. Зоокумарин элюируют из колонки 50 мл метилового спирта. Элюат упаривают на водяной бане до небольшого объема (около 2 мл). Упаренный элюат с помощью небольшой порции эфира количественно переносят в делительную воронку, в которую прибавляют 50 мл подкисленной воды и 20 мл эфира. Смесь взбалтывают и отделяют эфирный слой. Водную фазу еще два раза обрабатывают эфиром (порции по 15 мл). [c.205] Определение зоокумарина. Водную фазу наливают в кювету спектрофотометра и регистрируют спектр поглощения раствора. При наличии зоокумарина в водной фазе в спектре наблюдаются максимум поглощения при 308 нм и ашнимум поглощения при 260 нм. Для количественного определения измеряют оптическую плотность водной фазы при 308 нм. Содержание зоокумарина в пробе находят по калибровочному графику или рассчитывают по удельному показателю поглощения. [c.206] Метод основан на извлечении зоокумарина из пищевых продуктов водой, хроматографической очистке полученных извлечений и последующем определении оптической плотности раствора препарата в УФ-области спектра. [c.206] Ледяная уксусная кислота. [c.206] Сорбенты целит 545, силикагель. [c.206] Хроматографическая колонка. В колонку для хроматографирования (длина 25 см, диаметр 1 см) вносят несколько миллилитров диэтилового эфира и 1 г целнта 545. После оседания целита на дно колонки в нее вводят суспензию, состоящую из 9 г силикагеля и небольшого количества эфира, затем вносят безводный сульфат натрия в таком количестве, чтобы слой его имел высоту около 3 см. После этого внизу колонки открывают кран и медленно сливают эфир до тех пор, пока уровень его в колонке не совпадет с верхним уровнем сульфата натрия. [c.206] Изолирование и очистка зоокумарина. Измельчают 6 г пищевого продукта, подлежащего исследованию, прибавляя при этом 30 мл воды. Полученную суспензию переносят в делительную воронку и приливают 5 мл 5 н. соляной кислоты и 30 мл диэтилового эфира. Смесь взбалтывают в течение 45 мин, затем отделяют эфирную вытяжку, переносят ее в колбу и выпаривают до тех пор, пока в колбе не останется около 5 мл жидкости. [c.206] Эту жидкость вводят в хроматографическую колонку, а колбу несколько раз ополаскивают эфиром (по 10 мл) и этот эфир также вносят в колонку. Внизу колонки открывают кран и дают возможность эфирной вытяжке впитаться в сорбент. Колонку промывают эфиром и собирают 150 мл элюата. [c.206] Вернуться к основной статье