ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Люминесцентный молекулярный спектральный анализ из "Молекулярные спектральный анализ" Методы люминесцентного анализа более разнообразны по сравнению с другими видами спектрального молекулярного анализа, что затрудняет их изложение. Остановимся на наиболее характерных методах анализа. [c.106] При переходе вещества из твердого состояния в раствор цвет флуоресценции изменяется, смещаясь в сторону более коротких длин волн. [c.106] В ряде случаев на флуоресценцию влияет количество водородных ионов, так как ионы и недиссоциированные молекулы светятся по-разному. С изменением диссоциации вещества изменяется спектр флуоресценции. Поэтому одни и те же флуоресцирующие красители в различных средах дают различное свечение. Например, краситель пиронин в растворах с рН 10 диссоциирует и дает желтое свечение. В растворах рН 10 — не диссоциирует и дает синее свечение. При обработке растительных клеток диссоциированная форма связывается с белком протопласты, и протопласта имеет желтое свечение, а недиссоциированная форма концентрируется в липоидах и светится синим светом. [c.107] На свечении флуоресценции сильно сказываются растворители. В ряде случаев они гасят свечение, а в других усиливают флуоресценцию. Но растворитель не может изменить окраску свечения. [c.107] Поэтому необходимо проверить исследуемые препараты на чистоту. [c.107] Методы люминесцентного анализа можно разделить на несколько основных групп. Наблюдение собственной флуоресценции является наиболее простым методом. С помощью этого метода можно проводить определение химического состава вещества. Однако, не всегда этот метод прост. Спектры люминесценции большинства веществ имеют широкие полосы свечения. Отсутствие линий и типичной структуры затрудняет проведение химического анализа. [c.107] Большинство органических соединений флуоресцирует синим и фиолетовым светом, реже зеленым. Немногие вещества флуоресцируют красным светом (например, хлорофилл и порфирины). [c.108] Однозначно люминесцентный анализ смеси проводится лишь в том случае, если способностью флуоресцировать обладает лишь один компонент смеси или два компонента со свечением флуоресценции в различных областях спектра. [c.108] Наблюдение собственной флуоресценции можно производить или непосредственно глазом или с помощью спектральных приборов типа УМ-2, ИСП-51, ДФС-12, ЗМР-3. [c.108] Визуальное наблюдение может производиться в специальных ящиках, в которые помещаются исследуемые образцы, а через окно со вставленным светофильтром производится освещение ртутной лампой, возбуждающей флуоресценцию. Возбуждение спектров люминесценции производится ультрафиолетовым светом, чаще всего от ртутных ламп типа ПРК-2, которые применяются со светофильтрами, не пропускающими видимого света, который мешает наблюдению люминесцентного свечения. [c.108] Так же как и в химии, для определения крахмала, пользуются йодом, в присутствии которого крахмал синеет, так и для определения многих веществ, не обладающих собственным свечением, пользуются в люминесцентных методах анализа специальными реактивами, при взаимодействии с которыми образуются светящиеся составы. Таким путем, например, легко обнаруживается витамин В, приобретающий характерное свечение при взаимодействии с красной кровяной солью. [c.108] Количественный анализ можно проводить в достаточно разбавленных растворах, где интенсивность свечения пропорциональна концентрации. Интенсивность свечения флуоресценции измеряют фотометрами типа ФТ, спектрометрами типа СФ-4, УМ-2, ДФС-12 и на спектрографах типа ИСП-51, ИСП-28. [c.108] Освещение исследуемого раствора, или вещества, производят со стороны боковой стенки кюветы, или же, в случае сильно поглощающего раствора, под небольшим углом, как это схематически изображено на рис. 44. [c.108] Метод наблюдения вторичной флуоресценции в основном применяется при микроскопировании в биологии и медицине. Вместо обычных красителей применяются флуоресцирующие красители, носящие название флуо-рохромов. [c.109] При окраске флуорохромами отдельные детали исследуемого препарата светятся различными цветами, в зависимости от pH. Преимущество флуорохромов перед обычными красителями состоит еще и в том, что они нужны в очень малых концентрациях и их влияние на исследуемый объект обычно незначительно. [c.109] Исследование люминесценции микропрепаратов производится либо на специальных люминесцентных микроскопах, либо на обычных несколько переделанных микроскопах. [c.109] Объективы и окуляры микроскопов при исследовании люминесцентного свечения могут быть обычными, стеклянными, так как препарат рассматривается не в проходящем свете, а в свете, излучаемом самим препаратом, в свете люминесценции, который лежит в видимой области спектра. [c.110] Иногда препараты пропитывают не одним, а несколькими разными флуорохромами, в результате чего под микроскопом они оказываются живописно окрашенными. [c.110] Вернуться к основной статье