ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Предисловие к русскому изданию из "Введение в микро масштабную высокоэффективную жидкостную хроматографию" В наши дни высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) приобрела распространение благодаря прогрессу в приборостроении, базирующемуся на достижениях механики, электроники и вычислительной техники. В настоящее время основные усилия исследователей в этой области направлены на увеличение селективности и эффективности разделения, повышение чувствительности и ускорение анализа. ()дин нз путей решения этих задач - уменьшение размеров.колонки. [c.7] Настоящая книга должна послужить источником как предварительной, так и более глубокой информации для тех, кто интересуется микро-ВЭЖХ и собирается практически использовать этот метод. Читатель найдет здесь сведения как об исследованиях, ведущихся в настоящее время, так и о практическом применении метода. [c.7] Если предположить, что эффективность разделения на двух колонках различного диаметра одинакова, то концентрация элюируемых из колонки компонентов обратно пропорциональна квадрату ее внутреннего диаметра или, что то же самое, сечению колонки. Следовательно, микро-ВЭЖХ в сочетании с концентрационным детектором, по-видимому, повысит чувствительность о(5наружения, что особенно важно при определении примесей, а также при проведении биохимических анализов. [c.9] Разделение методом ВЭЖХ часто проводится при градиентном элюировании и программировании скорости потока. Что касается программирования температуры, то к нему прибегают при разделении термостойких соединений достигаемый при этом эффект аналогичен получаемому при градиентном элюировании. Для нахождения оптимальных условий разделения новых объектов приходится расходовать большие объемы подвижной фазы и испытывать колонки различных типов. Микро-ВЭЖХ существенно облегчает задачу, поскольку в этом случае для нахождения оптимального состава элюента достаточно всего несколько миллилитров подвижной фазы. [c.9] Другим преимуществом микро-ВЭЖХ является возможность ее сочетания с масс-спектрометрией (МС). Чем меньше расход подвижной фазы, тем легче осуществляется прямое сочетание ЖХ с МС. Следовательно, для создания удовлетворительной системы ЖХ/МС внутренний диаметр колонки должен быть как можно меньше. [c.9] Открытые колонки отличаются от колонок других типов тем, что роль носителя неподвижной фазы в данном случае выполняет внутренняя поверхность капилляра. При попытке применить в ЖХ [1, 10] капиллярные колонки, аналогичные используемым в ГХ, выяснилось, что эффективность их мала из-за малой скорости диффузии молекул в жидкости. Как показали Исии и сотр. [8], для разделения методом ЖХ пригодны открытые капиллярные колонки диаметром менее 60 мкм. Характеристики колонок подроб1 о рассмотрены в гл. 3. [c.10] НИЙ диаметр колонки увеличился до 5 - 6 мм. К этому времени большинство хроматографистов пришли к убеждению, что колонки самого малого диаметра работают плохо. Предпочтение отдавалось колонкам относительно большого диаметра ввиду сложности заполнения колонок малого диаметра насадкой с частицами размером 5-10 мкм. Кроме того, существовавшие в то время детекторы были мало пригодны дл регирг-рации узких пиков, обычно элюируемых из колонок малого диаметра. ЭФи детекторы были предназначены в основном для работы с колонками размером 2,1 мм (внутр. диам.) х 500 мм, эффективность которых достигла 500 теоретических тарелок. Иначе говоря, они были предназначф1ы для обнаружения пиков, соответствующих объему подвижной фазы порядка 200 мкл и более. В то же время эффективность колонки длиной 250 мм, заполненной микрочастицами, может достигать 10 ООО тарелок. Это означает, что ширина пика неудерживаемого компонента при внутреннем диаметре колонки 2,1 мм и длине 250 мм должна составлять всего 24 мкл. Очевидно, что такая колонка несовместима с обычным детектором, у которого объем кювета составляет 8 мкл. [c.16] В связи с этим после появления насадок, состоящих из микрочастиц, следовало бы полностью пересмотреть конструкцию приборов для ВЭЖХ. Однако хроматографисты ограничились лишь тем, что увеличили внутренний диаметр колонки [9]. Для колонки размером 4,6 мм (внутр. диам.) х 250 мм объем подвижной зы, соответствующей пику неудерживаемого компонента, составляет около 100 мкл. Такой пик можно обнаруживать посредством детектора с кюветой объемом 8 мкл без заметного уменьшения эффективности разделения, однако чувствительность при этом заметно снижается. [c.16] Вернуться к основной статье