ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Определение скорости гидролиза из "Химия и биология белков" О степени гидролитического расщепления белка можно поэтому судить, определяя число освободившихся карбоксильных или аминных групп или тех и других одновременно. [c.25] Ввиду того что аминокислоты представляют собой более слабые кислоты, чем пептиды (см. гл. V, табл. 6), гидролиз пептидов сопровождается некоторым уменьшением кислотности. Если в среде имеются углекислота и бикарбонат, то при гидролизе пептидов будет происходить поглощение углекислоты, величину которого можно измерить манометрически в аппарате Варбурга [17] по уменьшению давления углекислоты. [c.25] В то время как сг-аминогруппы аминокислот и концевые л-аминогруппы пептидов очень быстро реагируют с азотистой кислотой, Е-аминогруппы лизина реагируют очень медленно. Прн действии азотистой кислоты медленно разлагается с образованием азота также аммиак, который при гидролизе соляной кислотой отщепляется от амидных групп аспарагина и глутамина [18]. Объем образовавшегося азота можно измерить либо при атмосферном давлении, либо манометрически — при пониженном давлении [20]. Метод Ван-Слайка дает прекрасные результаты с большинством аминокислот и пептидов. Необходимо, однако, принимать в расчет, что сама азотистая кислота под действием сильно восстанавливающих веществ (например, цистеина) разлагается с образованием азота [21]. При определении азота глицина и его пептидов также получаются данные, превышающие теоретически вычисленные величины [22, 23]. [c.26] Число аминогрупп, освобождающихся в процессе гидролиза, можно определить также титрованием аминокислоты в ацетоне соляной кислотой, используя в качестве индикатора нафтоловый красный [24], или титрованием аминокислот, растворенных в ледяной уксусной кислоте, хлорной кислотой, применяя в качестве индикатора яркий крезиловый синий [25]. [c.26] Реакция сопровождается уменьшением объема, которое можно измерить дилатометрически. Этот метод усовершенствован до такой степени, что при его помощи можно проследить скорость ферментативного гидролиза в одной капле реакционной смеси [26]. [c.26] Образующийся альдегид немедленно конденсируется с восстановленным нингидрином. Продукт конденсации имеет синюю окраску, интенсивность которой можно измерить колориметрически [27]. Если нагревание с нингидрином ведется при pH 1—5, то методами газового анализа можно определить количество свободных аминокислот по количеству образовавшейся углекислоты. Ни белки, ни пептиды не реагируют с нингидрином при этих условиях [28]. [c.27] Вернуться к основной статье