ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Анализ высших жирных кислот методом обращенно-фазовой распределительной хроматографии на бумаге из "Исследование жирных кислот и липидов методами хроматографии" Несмотря на ряд методик (приводимых в этой главе), позволяющих проводить исследование довольно сложных смесей, с целью наиболее полной идентификации следует рекомендовать предварительное фракционирование природной смеси кислот на насыщенные и ненасыщенные (например, на силикагеле, в виде ртутных производных метиловых эфиров, с помощью низкотемпературной кристаллизации, спирто-свин-цовым методом), а последних — в тонком слое силикагеля или на колонках, как это представлено в соответствующих разделах. Разветвленные жирные кислоты от неразветвленных можно разделить с помощью мочевины. В том случае, когда исследователя интересуют только насыщенные жирные кислоты, ненасыщенные можно удалить путем их окисления. [c.6] Вследствие всего сказанного методам непосредственного хроматографирования предпосылается описание методов предварительного фракционирования жирных кислот на группы. [c.6] Разделение жирных кислот на насыщенные и ненасыщенные. Наиболее надежным способом (в смысле чистоты разделения) является разделение на силикагеле (описание этого метода приведено в главе И). Однако наиболее простым по выполнению и дающим довольно чистое разделение является метод низкотемпературной кристаллизации. [c.6] Фракционирование жирных кислот этим способом основано на различной растворимости насыщенных и ненасыщенных жирных кислот при низких температурах. [c.7] Основная ценность метода заключается в возможности как отделения насыщенных кислот от ненасыщенных, так и разделения смесей ненасыщенных кислот в препаративных целях. Предпочтительнее разделять их в виде метиловых эфиров, поскольку свободные жирные кислоты легко образуют ассоциированные соединения. Наиболее четкого разделения достигают в полярных растворителях (ацетон, метиловый и этиловый спирты, метилацетат, метилэтилкетон, петролейный эфир) при температуре —25° из 5—10% растворов. [c.7] Простая кристаллизация жирнокислотной смеси, содержащей первично миристиновую, пальмитиновую, стеариновую, гексадеценовую, олеиновую, линолевую и линоленовую кислоты из 5—10% растворов в ацетоне при —25° с последующим одноразовым промыванием кристаллов в охлажденном до —40° растворителе может обеспечить более простую и более эффективную сепарацию насыщенных кислот от ненасыщенных, чем это может быть достигнуто при использовании свинцово-спиртового метода. [c.7] В цилиндр или сосуд Дьюара наливают растворитель, обычно ацетон, и медленным добавлением сухого льда при перемешивании снижают температуру до нужного уровня. После этого в этот раствор опускают сосуд с растворенными в ацетоне жирными кислотами, а в наружный и внутренний сосуды — термометры. Через 30—40 минут раствор над осадком отсасывают через воронку Бюхнера (фильтровальная бумага смочена растворителем). [c.7] Если трудно подобрать воронку Бюхнера соответствующих размеров, ее можно заменить специально изготовленной воронкой из стекла. [c.7] Смесь кислот, выделенных из природного липида, разделяют на насыщенные и ненасыщенные одним из общепринятых методов. Предельные жирные кислоты изостроения отделяют от кислот нормального строения с идентичным молекулярным весом, используя метод, основанный на способности последних образовывать аддукт с мочевиной. Известно, что органические вещества с неразветвленной углеводородной цепью способны давать с мочевиной кристаллический комплекс — аддукт, который не образуется с веществами, имеющими разветвленную цепь. [c.8] Для получения аддукта насыщенные жирные кислоты, мочевину, метанол и изопропиловый спирт смешивают в соотношении 1 5 7 3,5 (изопропиловый спирт повышает растворимость мочевины в метаноле). После этого нагревают на водяной бане с обратным холодильником до гомогенного состояния и охлаждают при комнатной температуре в течение 12—20 часов. Выпавший осадок — аддукт насыщенных жирных кислот с мочевиной — отфильтровывают и промывают 8—10 объемами бензола. Фильтрат отмывают водой от примесей мочевины, сушат све-жепрокаленным сернокислым натрием и упаривают. Остаток представляет собой разветвленные жирные кислоты насыщенного ряда. Для разрушения аддуктов жирных кислот с мочевиной достаточно нагревание в водном растворе. [c.8] Использование хроматографии на бумаге для разделения смесей жирных кислот стало возможным после введения принципа обращенных фаз [198]. Этот метод, получивший широкое распространение, основан на способности хроматографируемых веществ, растворенных в неподвижной гидрофобной фазе, разделяться вследствие непрерывного распределения между гидрофобной и подвижной гидрофильной фазами. [c.8] Однако эти методы не отличались хорошей воспроизводимостью и не обеспечивали четкое разделение смесей высших жирных кислот. Попытки применить разделение жирных кислот в виде их производных (гидроксамовых, ацетол-эфирных и др.) оказались не совсем удачными в том отношении, что для получения производных требуется значительное количество исходных кислот. [c.9] В дальнейшем было предложено много способов гидрофобизации бумаги, в том числе путем пропитывания глицеридами растительных масел, силиконом, нафталином, парафином, керосином, парафиновым маслом, алифатическими углеводородами. Наибольшее распространение получило применение с этой целью вазелинового масла. [c.9] Жирные кислоты можно разделять методами одномерной и двумерной хроматографии восходящим и нисходящим способами, а также методом круговой хроматографии на бумаге. Следует отметить, что метод восходящей хроматографии имеет преимущество по сравнению с нисходящим способом хроматографирования ввиду хорошей воспроизводимости, простоты аппаратуры, легкости проведения серийных анализов. [c.9] В составе природных липидов часто содержатся насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты как с алифатической, так и с разветвленной цепью, с четным и нечетным числом углеродных атомов. [c.9] На хроматограммах разветвленные жирные кислоты почти совпадают с неразветвленными идентичного молекулярного веса, а насыщенные жирные кислоты — с ненасыщенными с углеродной цепью, удлиненной на два углеродных атома (например, пальмитиновая кислота совпадает по положению на хроматограммах с олеиновой, стеариновая— с эйкозеновой и т. д.). Таким неразделяющимся на хроматограммах парад, кислот было дано название критические пары . [c.9] Вернуться к основной статье