ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Обнаружение и определение тиофоса и продукта его метаболизма — -нитрофенола в биосубстратах из "Определение ядохимикатов в биологических субстратах" Стеклянную хроматографическую колонку (диаметр 15 мм) заполняют слоем окиси алюминия высотой 100 мм и поверх — слоем сернокислого натрия высотой около 50 мм. Вливают в колонку примерно 25 мл бензола и, как только уровень жидкости в колонке достигнет поверхности наполнителя, начинают добавлять бензольный экстракт. Бензола должно вытекать из колонки не более 3 мл в минуту. Дважды последовательно ополаскивают сосуд, в котором содержался экстракт, 5 мл чистого бензола и добавляют промывную жидкость в колонку. Продолжают пропускать бензол, добавляя еще 20 мл маленькими порциями. В течение всей этой операции уровень жидкости в колонке не должен опускаться ниже поверхности наполнителя колонки. Вытекший из колонки бензол отбрасывают, а адсорбированные тиофос и ге-нитрофенол последовательно элюируют 50 мл эфира (тиофос) и 50 мл метилового спирта (ге-нитрофенол) элюаты собирают отдельно. [c.51] Опрыскивают одну из хроматограмм спиртовым раствором едкого кали и нагревают в печи при 100° в течение 5 мин. для гидролиза тиофоса до ге-нитрофенола. Появление канареечно-желтой полосы па опытной части хроматограммы, по оттенку и локализации соответствующей полосе на контрольной, указывает на наличие тиофоса в исследуемом образце. Величина В г для этой полосы приблизительно 0.7. [c.52] Для количественного определения делают вырезки из другой необработанной хроматограммы, руководствуясь положением желтых полос на обработанной щелочью хроматограмме. Вырезают как исследуемый образец, так и контрольный. Каждый из вырезанных бумажных листов элюируют этиловым спиртом. Для этого бумажный лист подвешивают на стеклянном крючке, расположенном на кончике холодильника. Соединяют холодильник с маленьким сосудом, в который помещают подвешенный бумажный лист. Через холодильник вливают 3 мл этилового спирта и кипятят в течение 20 мин. Таким образом, элюция выполняется конденсирующимися парами этилового спирта. Затем через холодильник вливают 4 капли раствора соляной кислоты, 3 мл дистиллированной воды, добавляют одну гранулу цинка и снова кипятят с обратным холодильником в течение 10 мин. [c.52] Переносят количественно раствор восстановленного тиофоса (без цинка) в мерную пробирку (объемом 10 мл) с помощью 1 мл воды, добавляют 4 капли азотистокислого натрия, смешивают и через 10 мин. вносят еще 4 капли сульфамата аммония, опять перемешивая. Через 10 мин. добавляют 4 капли раствора пафтилэти-лендиамина, смешивают и доводят до 10 мл дистиллированной водой. Через 30 мин. определяют оптическую плотность краснофиолетовой окрасоки раствора в области 555 ммк относительно фона реактивов. [c.52] При тех же самых условиях, начиная с хроматографии на бумаге, готовят образцы со стандартными растворами тиофоса для градуировочного графика. С помощью графика определяют содержание тиофоса в хроматографируемой части исследуемого образца, а затем рассчитывают содержание тиофоса в целом образце. [c.52] Все этапы количественного определения должны выполняться при пониженной освещенности. В противном случае возможно фотокаталитическое разложение тиофоса и его дериватов, особенно азосоединения. [c.52] Хроматографию производят на бумаге типа Ватман 1 шириной 12 см. На чистый лист наносят 100 мкл исследуемого образца и 20 мкл стандартного раствора п-нитрофенола так же, как это описано для тиофоса. [c.53] Через 1—2 часа начинают проявлять хроматограмму н-бута-нолом, насьщенным аммиаком, и продолжают эту процедуру до тех пор, пока фронт растворителя не пройдет 20 см. Просушивают хроматограмму в токе сухого воздуха в течение 30 мин. Желтая полоса на хроматограмме исследуем01Г0 образца, идентичная по виду и локализации полосе контрольного образца, указывает на присутствие ге-нитрофенола. Величина Rf для ге-нитрофенола составляет приблизительно 0.5. [c.53] Для количественного определения вырезают желтую полосу из хроматограммы образца и элюируют ге-нитрофенол кипящим метиловым спиртом, используя способ, описанный для тиофоса. К полученному раствору добавляют 1 каплю водного раствора едкого кали, доводят объем до 10 мл метиловым спиртом и определяют оптическую плотность на фотометре в области 350— 450 ммк. Количество ге-нитрофенола в хроматограмме определяют из графика, построенного на основании анализов стандартных растворов ге-нитрофенола, обработанных описанным методом. Для определения содержания ге-нитрофенола в анализируемом образце производят соответствующий расчет. [c.53] Определяемое количество веществ составляет 85—90%, что можно учитывать для более точного подсчета содержания веществ в исследуемой ткани. Точность определения для обоих веществ составляет 8%. Чувствительность качественного определения тиофоса — 0.5 мкг количественное определение можно вести при содержании 1 мкг тиофоса в образце и более. [c.53] Метод может быть использован в анализе любых животных тканей. При анализе мочи или крови возможны значительные упрощения. Не требуется производить хроматографическую очистку на колонке с окисью алюминия. Достаточно осадить белки трихлоруксусной кислотой, экстрагировать фильтрат бензолом, упарить раствор и произвести хроматографлю на бумаге (Eme, 1958). [c.53] Вернуться к основной статье