ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Определение хлорофилла из "Экологическая пронрамма аква-лайф Выпуск 3" Хлорофилл-а — пигмент, присутствующий во всех зеленых растениях. Метод определения хлорофилла-а установлен международным стандартом ИСО 10260. По концентрации хлорофилла-а судят о степени трофикации поверхностных вод. [c.343] Вместе с другами измерениями активной биомассы, определение концентрации хлорофилла-а дает представление о количестве и потенциальной активности фотосинтеза водорослей. Сопутствующие пигменты хлорофилл-в и хлорофилл-с, а также некоторые метаболиты данным методом не определяются. Они могут быть определены полуколичест-венно для введения поправки на интерференцию при определении хлорофилла-а, а также для оценки количества неактивной биомассы водорослей. [c.344] Хлорофиллы чувствительны к свету и кислороду воздуха, особенно при их извлечении из воды. Во избежание фотохимического разрушения хлорофиллов образцы не следует подвергать воздействию яркого света продолжительное время. Все операции следует производить при приглушенном свете. [c.344] Сущность метода определения хлорофилла-а состоит в сборе растений при фильтрации проб воды, экстракции органическим растворителем пигмента и последующем спектрометрическом определении. [c.344] Следует использовать реактивы только марки чда и деионизированную воду. [c.344] Соляная кислота, с аС ) =3 моль/л. [c.344] Этанол, водный раствор 90 %. Можно применять денатурированный спирт, но чистый этанол предпочтительнее, так как при этом нет необходимости определять влияние денатурирующих добавок на полноту экстракции. [c.344] Применяют обычное лабораторное оборудование, а также спектрометр с разрешающей способностью 1—2 нм при длине волны 665 нм с кюветами 1 —5 см и экстракционные сосуды о емом 30—50 мл с завинчивающейся тефлоновой пробкой. [c.344] Используют также фильтрующее устройство, стекловолокнистые фильтры из боросиликатного стекла для фильтрации проб и экстратов, а также водяную баню, поддерживающую температуру 75 1 °С. [c.344] После отбора проб следует сразу же провести экстрагирование хлорофиллов. Если необходимо, хранение проб допускается в холодильнике не более 8 ч. [c.344] Отобранные пробы, объемом от 0,1 до 2 л в зависимости от концентрации водорослей, фильтруют на стекловолокнистом фильтре. Затем высушивают фильтр в вакууме и помещают его в экстракционный сосуд. Если он не помещается в сосуд, его делят на кусочки. [c.344] Затем суспензию фильтруют через плотный фильтр, отмывают оставшуюся на фильтре суспензию этанолом и фильтрат собирают в калиброванный мерный сосуд обьемом 50 или 100 мл с пробкой, доводят до метки и убирают от света. [c.345] Вариант экстракции В. Вносят отмеренный обьем этанола (20 или 25 мл) в экстракционный сосуд, затем в него погружают кусочки фильтра и закрывают пробкой для предотвращения потерь экстрагента. Сосуд слегка встряхивают и погружают в нагретую до 75 °С водяную баню. Нагревают сосуд 5 мин при встряхивании, затем дают остыть в течение 15 мин при комнатной температуре. Отстоявшийся верхний слой экстракта фильтруют в чистый экстракционный сосуд (в него не добавляют чистого растворителя). [c.345] Перед фотометрическим определением время хранения должно быть минимальным. Но при необходимости можно хранить в холодильнике при 4 °С до 3-х дней, а в морозильнике при температуре ниже -25 °С хранение возможно до 30 дней. [c.345] Чистый экстракт переносят пипеткой в спектрометрическую кювету. Поглощающую способность экстракта измеряют при 665 нм и 750 нм относительно этанола. Затем проводят повторное измерение. Экстракт перед повторным определением подкисляют 0,01 мл соляной кислоты на 10 мл объема экстракта, измеряют при 665 нм и при 750 нм. [c.345] отношение А/Аа для чистого хлорофилла-а. [c.345] Вернуться к основной статье