ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Фотометрическое определение с индолфенилацетатом в качестве субстрата из "Химия травляющих веществ Том 2" Для приготовления примерно 1500 кусков достаточно 100 мл раствора. Индикаторная бумага хранится неограниченно долго. Для серии определений следует использовать бумагу одного приготовления. [c.178] Раствор фермента —2%-иыя раствор лиофилизованной сыворотки крови лошади в буфере Михеля (pH 8,0) хранится в холодильнике. [c.178] Сначала проверяют пригодность бума ги. Для этого наносят на одно и то же место предметного стекла по 0,05 мл воды и раствора фермента и рядом помещают 0,1 мл буфера сравнения. На оба эти участка накладывают кусочки суб- страт-индикаторной бумаги, накрывают их стеклом и определяют время выравнивания окрасок обоих отрезков индикаторной бумаги, которое должно равняться 3—7 мин. Если выравнивание окраски не укладывается в указанный промежуток времени, то причиной этого может быть повышенное содержание кислоты в бумаге или индикаторе. В этом случае приходится готовить свежую индикаторную бумагу, используя другой сорт бумаги, либо повторить пропитку бумаги раствором субстрата и индикатора, который предварительно нейтрализуют прибавлением 0,1 н. раствора NaOH до появления зеленовато-синей окраски. [c.178] Перед определением пробу воды нужно нейтрализовать. Для этого к 10 мл исследуемой воды прибавляют 5 капель 0,1 %-ного раствора бромтимолового синего в 20%-ном спирте и осторожным прибавлением 0,01 н. раствора NaOH или НС1 доводят окраску до зеленовато-синей. Если жесткость испытуемой воды велика, то могут наблюдаться различия в изменении окраски по сравнению с контрольной пробой, что объясняется буферным действием содержащихся в воде солей и может явиться причиной ошибочных результатов. Целесообразно поэтому вместо дистиллированной воды использовать для контрольной пробы испытуемую воду, предварительно продегазированную активированным углем. К 5 мл зараженной воды добавляют набранное на кончик шпателя достаточное количество порошкообразного активированного угля. После многократного встряхивания уголь отфильтровывают и фильтрат нейтрализуют. [c.178] Обнаружение ингибитора. На предметное стекло пипеткой наносят 2 капли по 0,05 мл раствора фермента. Левую каплю смешивают с 0,05 мл испытуемой воды, а правую — с 0,05 мл чистой воды, приготовленной для контрольной пробы. Перемешивание осуществляют двумя тонкими стеклянными палочками, следя за тем, чтобы всегда употреблялась соответствующая палочка. После инкубирования (5 мин для зарина, зомана, табуна, ДФФ и 15 мин —аля более медленно реагирующих ингибиторов) на оба участка накладывают кусочки индикаторной бумаги и покрывают покровным стеклом. В то время как индикаторная бумага на правой капле (контрольная проба) постепенно изменяет свою окраску от сине-зеленой через зеленую, лимонно-желтую до светло-желтой, бумага на левой капле при наличии фосфорорганических ингибиторов остается сине-зелекой или изменяет свой цвет значительно медленнее. [c.178] Средняя часть калибровочной кривой (20—80% угнетения) охватывает область концентраций фосфорорганических ингибиторов указанного выще порядка. При больщем содержании ОВ исследуемые образцы приходится дополнительно разбавлять. Так, если индикаторная бумага не изменяет саоей окраски или на это требуется 30—40 мин, то образец следует последовательно разбавлять чистой водой каждый раз в отношении 1 10 и проводить определение для каждого разбавления. [c.179] По калибровочной кривой, построенной для зарина, этому угнетению соответствует значение рТ (отрицательный логарифм концентрации зарина в мг/мл), равный 5,2. Чтобы определить содержание зарина в исследуемой воде, проводят следующий пересчет. [c.179] Так как проба воды была разбавлена в отношении 1 100, то содержание зарина в пробе составляет 6,3 10 100, т. е. 6,3-10 мг/мл или в пересчете на 1 л — 0,63 мг/л. [c.179] Раствор субстрата (3,3 10 М раствор) — раствор 0,08 г индофенилацетата (т. пл. после перекристаллизации из петролейного эфира 115—116°С) в 100 мл абсолютного спирта. [c.179] В этом способе можно использовать эстеразу эритроцитов (АХЭ), которая более удобна для определения некоторых фосфорорганических ингибиторов. расщепление субстрата осуществляют, примерно с одинаковой скоростью. [c.180] Вернуться к основной статье