ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Хроматографическое разделение органических веществ па колонке с окисью алюминия из "Лабораторные работы в органическом практикуме" Восходящие хроматограммы. Прибор, в котором получают восходящие хроматограммы, представляет собой цилиндр с крышкой, снабженной резиновой прокладкой можно использовать также мерный цилиндр емкостью 1 л. Перед работой необходимо получить у лаборанта лист специальной фильтровальной бумаги, отрезанной по размеру цилиндра и расчертить его карандашом так, как это показано на рис. 18 при помощи линейки провести на расстоянии 2,5 см от нижнего обреза горизонтальную прямую, нарисовать шесть кружочков диаметром 3—4 мм на расстоянии 2 см друг от друга и сделать соответствующие надписи (рис. 18). [c.30] Работа по нанесению на бумагу растворов аминокислот производится на специальном столе. Бумагу кладут на предварительно тщательно вымытое стекло, под нижний край бумаги подкладывают стеклянную пластинку так, чтобы та часть бумаги, где нарисованы кружки, оставалась на весу и не касалась поверхности стекла. Далее при помощи капилляров, специально приготовленных для каждого раствора, на бумагу в кружочки последовательно наносят капельки растворов исследуемых смесей аминокислот и свидетелей . Надо так предварительно напрактиковаться, чтобы наносимая капля не распространялась за пределы нарисованного кружочка. Нанесение раствора на каждый кружочек производится 5—8 раз после высыхания предыдущей капли. [c.30] После высыхания всех нанесенных капель надо тщательно вымыть руки с мылом, свернуть бумагу в цилиндр и сшить лист через край так, чтобы края не накладывались друг на друга и чтобы получился более или менее правильный цилиндр. Особое внимание следует обратить на то, чтобы при сшивании точки А и Б (рис. 18) совпали. [c.30] На дно стеклянного цилиндра осторожно, чтобы не замочить стенок, наливают растворитель, являющийся смесью нормального бутилового спирта, уксусной кислоты и воды (4 1 5). Высота слоя растворителя не должна превышать 2 см от дна цилиндра. Затем бумажный цилиндр осторожно ставят вертикально в стеклянный цилиндр так, чтобы он не касался стенок и чтобы нанесенные капли находились на нижнем конце бумажного цилиндра. Для хорошей центрировки бумажного цилиндра в стеклянном часто приходится использовать кусочки мятой фильтровальной бумаги, которые следует класть сверху между стенками бумажного и стеклянного цилиндров. Стеклянный цилиндр плотно закрывается крышкой с резиновой прокладкой и оставляется на ночь. [c.30] На следующее утро следует осторожно вынуть бумажный цилиндр, пометить карандашом границу фронта растворителя, распороть шов, выпрямить бумагу и повесить ее для высушивания под тягу. Через 4—5 час растворитель полностью испаряется и хроматограмму можно проявлять. [c.30] При проявлении хроматограммы следует опрыскать ее несколько раз из пульверизатора раствором нингидрина так, чтобы бумага становилась только слабо влажной и на ней не образовывались бы струйки раствора, просущить на воздухе, а затем прогреть на пламени газовой горелки (весьма осторожно и все время передвигая) до появления лиловых пятен. Значительно лучще просущить хроматограмму постепенно в темноте. [c.31] Радиальные хроматограммы. Прибор для получения круговых хроматограмм состоит из двух чашек Петри равного диаметра. В нижнюю из них помещают растворитель указанного в предыдущем разделе состава смесь бутилового спирта, уксусной кислоты и воды. [c.32] После высыхания всех нанесенных капель необходимо тщательно вымыть руки с мылом, сделать небольшое отверстие в центре диска и вставить в него фитиль — скрученную узкую полоску фильтровальной бумаги, — длина которого соответствует высоте нижней чашки Петри. Затем закрывают диском нижнюю чашку Петри так, чтобы конец фитиля бул погружен в растворитель, а сверху диск прикрывают второй чашкой Петри. Камеру оставляют в покое до тех пор, пока растворитель, распространяясь радиально по бумаге, не окажется на расстоянии 0,5—1,0 см от краев диска (рис. 20). После этого хроматограмму вынимают, отмечают карандашом границу растворителя и сушат на воздухе, в сушильном шкафу или в токе теплого воздуха. Далее хроматограмму несколько раз опрыскивают из пульверизатора раствором нингидрина в ацетоне так, чтобы бумага становилась только слабо влажной, сушат на воздухе, а потом осторожно прогревают в токе горячего воздуха до появления лиловых пятен. Пятна легко обводят карандашом и для закрепления опускают в ванночку с раствором сульфата никеля. [c.33] Идентификация компонентов контрольной смеси производится путем сравнения величины Нг (см. предыдущий раздел) для каждого пятна смеси с величинами Rf свидетелей . [c.33] При последующем добавлении в колонку растворов хроматографируемы веществ этот тампон будет предохранять окись алюминия от взмучивания. [c.34] Вернуться к основной статье