ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Двухмерная нисходящая хроматография на бумаге. Разделе- j ние и идентификация аминокислот из "Современные методы исследования в органической химии" Двухмерная нисходящая хроматография на бумаге. [c.24] Чистые аминокислоты для сравнения. Применяют растворы чистых аминокислот концентрации 0,01 М в 10%-ном изопропиловом спирте (для хроматографии). [c.25] Употребляют только что собранную мочу (такая моча имеет высокое содержание аминокислот). [c.25] Белковый гидролизат. Проводят гидролиз сывороточного альбумина (см. гл. 7) или желатины 100 мг белка кипятят с обратным холодильником в течение ночи с 3 мл концентрированной соляной кислоты и 2 мл воды. Гидролизат разбавляют 10 мл воды, нейтрализуют 2 н. раствором едкого натра до pH 7 [по потенциометру или же в присутствии внешнего индикатора — фенолового красного и бромкрезолового зеленого (1 1) изменения цвета pH 6,6 — желтый, 6,8 — зеленоватый, 7,0 — серый, 7,2 — пурпурный, 7,4 — темно-пурпурный] и доводят объем водой до 50 мл. [c.25] Чтобы избежать посторонних пятен, следует, насколько это возможно, не касаться листов бумаги руками и не класть листы на стол. [c.25] Погружают короткий край листа бумаги в стеклянную кювету с растворителем (см. рис. 6) и на верхнюю часть листа кладут тяжелый стеклянный стержень, который попадает между штифтами на одной из сторон камеры. Снимают зажимы. [c.26] Благодаря наличию поддерживающих палочек один лист бумаги не соприкасается с другим (см. рис. 6). Одновременно в камере можно обрабатывать 6 листов, по три с каждой стороны кюветы. [c.28] Начинают хроматографировать в полдень и оставляют прибор на ночь. В холодную погоду, чтобы фенол не кристаллизовался, камеру помещают в теплую комнату или пользуются камерой-термостатом (25°). [c.28] Каждый лист вынимают из камеры вместе со стеклянной палочкой. Для этого прикрепляют каждую полосу бумаги к поддерживающей ее стеклянной палочке металлическими зажимами, подкладывал под них кусочки фильтровальной бумаги, и отрезают короткую часть полосы в кювете лезвием безопасной бритвы. Листы подвешивают в вытяжной шкаф и держат их там, пока фенол полностью не улетучится (около 24 час.) или сушат листы в токе теплого воздуха (приблизительно 45 мин. для трех листов). [c.28] Положение фронта фенола отмечают карандашом. Нельзя прикасаться к бумаге пальцами. [c.29] Высушенные полосы бумаги помещают в другую камеру, предназначенную для хроматографирования в омеси бутанола с уксусной кислотой. Полосы бумаги на этот раз закрепляются так, чтобы полученный ряд пятен размещался параллельно кювете и ближе к ней, т. е. фенольный фронт шел перпендикулярно кювете. [c.29] Полосы бумаги извлекают из камеры, отмечают карандашом фронт растворителя и высушивают в вытяжном шкафу или струей теплого воздуха. [c.30] Вернуться к основной статье