ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Биохимические объекты анализа из "Импульсная полярография" Принципиальная возможность использования импульсной полярографии для исследования конформационных переходов полинуклеотидов основана на различии потенциалов пиков восстановления у оснований, входящих в макромолекулу со структурой статистического клубка, и у тех же оснований в макромолекуле со структурой двойной спирали. У первых пик расположен при более отрицательных потенциалах, а у вторых— при более положительных. Палечек обозначает эти пики, как пик П1 [ п=—1,6 В (р.д.)] и пик И [Еа=—1,5 В (р.д.)] соответственно, поскольку при более положительных потенциалах на ДИП наблюдается и пик I, который, по-видимому, имеет емкостной характер. [c.213] По ДИП удалось установить, что слабое у-излуче-ние не приводит к денатурированию ДНК. Конфор-мационные переходы в области предплавления ДНК, установленные по ДИП, были подтверждены и методом кругового дихроизма [245]. Спектрофото-метрия оказалась менее чувствительной для обнару-, жения начальных стадий перехода двойная спираль — клубок. В области плавления ДНК ( 80°С) Палечек и Брабец [246] наблюдали полную корреляцию между данными импульсной полярографии и спектро-фотометрии. [c.214] Разрушение двойной спирали при действии у-лучей на ДНК проявляется в том, что облегчается образование межцепочечных димеров циклобутанового типа при последующем ультрафиолетовом облучении той же пробы ДНК, повышается pH раствора до значения, при котором появляется пик III, а также снижается температура плавления пробы ДНК (причем тем в большей степени, чем меньше pH раствора). Палечек полагает, что в процессе предплавления образуется промежуточная ДНК, молекулы которой характеризуются измененными углами и большими расстояниями между близлежащими остатками оснований. [c.214] ДИП растворов поли [С] зависят от pH [46]. При рН==7 появляется структура в виде двойной спирали в результате протонирования оснований и образования водородных связей между нитевидными макромолекулами. Об этом процессе можно судить по уменьшению высоты пика восстановления двойной связи цитозинового остатка в макромолекуле с Еа= —1,5 В (р. д.). В области pH = 6—4 протонированная пода [С] со структурой двойной спирали дает на ДИП пик с Ец=—1,35 В (р.д.). ДИП позволяют следить и за процессом протонирования поли [С] при постепенном понижении pH с 6 до 4. Преобладающая форма поли [С] в растворе проявляется в виде максимума на ДИП, а вторая форма —в виде точки изгиба. Высота пика на ДИП раствора цитозина не зависит от pH. [c.215] Зависимость На цитозина от АЕ такая ж4 как у поли [С], хотя в первом случае отклонения от пропорциональности между Яп и АЕ значительно меньше. [c.216] Адсорбция полинуклеотидов на поверхности электрода является причиной сравнительно низких пределов их обнаружения при очень малых значениях коэффициентов диффузии. Так, Смин поли [С] в растворе, pH которого равно 6, составляет 5-10 М в расчете на мономер, а Смин поли [А] в 0,5 М МаС1 (рН=5,8, цитратньш буферный раствор) — 1 10 М [247]. [c.216] Таким образом, по НИП и ДИП растворов ДНК при больших значениях Af можно изучать только их конформационные переходы, протекающие в электрическом поле электрода. Для анализа же смесей ДНК с различной конформацией пригодны только ДИП, полученные при малых значениях АЕ. [c.219] При регистрации НИП на приборе PAR-170 при i =l с, 4=40 мс и и—16 мс оказалось, что константа а =13,918, а константа /=—4,1. [c.220] Вернуться к основной статье