ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Частичное расщепление полинуклеотидов из "Органическая химия нуклеиновых кислот" Задача установления нуклеотидной последовательности является весьма сложной практически она успешно решена пока лишь в случае относительно низкомолекулярных РНК, таких, как тРНК и 5S РНК. Имеющие в настоящее время практическое значение методы установления последовательности нуклеотидов в полинуклеотидной цепи основаны на частичном расщеплении полинуклеотидов. Поэтому перед рассмотрением основных принципов, с помощью которых производится установление строения полинуклеотидов, и применением этих принципов к различным типам природных нуклеиновых кислот целесообразно коротко остановиться на используемых методах избирательного расщепления полинуклеотидной цепи. [c.64] Ступенчатое отщепление нуклеотидов с З -конца полидезоксири-бонуклеотида может быть выполнено обработкой полимера смесью диметилсульфоксида и уксусного ангидрида При этом происходит окисление З -концевой гидроксильной группы до карбонильного соединения и р-элиминация. [c.66] Последовательное отщепление остатков нуклеотидов с концов полинуклеотидной цепи может быть осуществлено и при действии ферментов — экзонуклеаз (обзор — см.о которых уже упоминалось выше . Некоторые сведения о наиболее широко применяемых ферментах такого рода приведены в табл. 1.2. [c.66] Как химические, так и ферментативные методы определения последовательности нуклеотидов поочередным отщеплением концевых мономеров полинуклеотидной цепи имеют свои ограничения при химическом методе это связано с неколичественным протеканием процесса и частичным расщеплением псевдоуридина под действием перйодата, при ферментативном — с отдельными разрывами фосфодиэфирных связей в середине полинуклеотидной цепи (за счет примесей других ферментов). Вследствие этого редко удается определить таким образом последовательности более 5—6 остатков нуклеотидов метод, однако, широко применяется для анализа олигонуклеотидов, образующихся при частичном расщеплении цепи РНК. [c.68] Близкой специфичностью обладает РНК-аза, выделенная из актиномицетов наряду с перечисленными выше типами нуклеотидов она катализирует также расщепление производных 1-М-ме-тилгуанозин-З -фосфата. [c.71] Промежуточными продуктами при расщеплении фосфодиэфирных связей под действием гуанил-РНК-азы, так же как и пиримидил-РНК-азы, являются циклические нуклеозид-2, З -фосфаты, которые переходят затем в нуклеозид-З -фосфаты. В некоторых случаях эта вторая стадия реакции протекает очень медленно и циклические фосфаты накапливаются в значительных количествах. [c.71] Помимо рассмотренных выше эндонуклеаз известен целый ряд ферментов, отличающихся меньшей специфичностью. Свойства ряда эндонуклеаз, которые могут быть применены для структурного анализа, приведены в табл. 1.3. [c.71] Вернуться к основной статье