ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Из предисловия к английскону изданию из "Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков" Резкая интенсификация научной деятельности за последние десятилетия вынуждает исследователя отказаться от чтения множества узкоспециальных публикаций и большую часть информации получать из заслуживающих доверия обзоров. Эта ситуация наблюдается и в области анализа аминокислот, пептидов и белков, где каждые пять лет появляются новые эффективные методы, способные заменить уже существующие. Например, в настоящее время газожидкостная хроматография успешно конкурирует с автоматической ионообменной хроматографией аминокислот по Муру и Стейну, которая полностью заменила микробиологический анализ, хроматографию на бумаге и другие методы количественного анализа, существовавшие до 1958 г. Определение последовательности пептидов — трудоемкая задача при использовании обычных методов — производится на данном этапе автоматически на секвенсере Эдмана, а последовательность небольших пептидов удобно определять с помощью масс-спектрометрии. [c.6] В рамках однотомного издания невозможно исчерпывающе изложить все новое, что возникло за последние годы в области белков, поэтому в сборник включены избранные разделы, которые, следует полагать, представляют интерес для всех, кто работает в этой обширной области. Все главы написаны специалистами, способными обобщить и объективно оценить текущие исследования. [c.6] Мы уверены в том, что предлагаемый сборник окажется полезным, а затраченный труд оправданным. [c.6] Обширные исследования в области хроматографии на ионообменных смолах, которая, по-видимому, все еш е находится в стадии бурного развития, основываются на ставших уже классическими работах Мура и Стейна. Серия основополагающих статей [1—13], вышедших в свет в 1949-м и последующих годах, способствовала появлению такого количества новинок и усовершенствований в хроматографической технике, что любая попытка охватить их все далеко превзошла бы рамки этой статьи. Известно много прекрасных обзоров [14—25] и монографий [26— 30], освещающих историю, теорию, методы и применение аминокислотного анализа. [c.7] Настоящая глава преднамеренно ограничена обсуждением тех систем и методик, которые в настоящее время не только отвечают современному уровню, но и наиболее широко используются. Она содержит описание различных приемов, пользуясь которыми, можно достичь желаемых результатов в случае специфических анализов. Играя несколькими из этих приемов одновременно, можно получить новые и единственные в своем роде результаты, необходимые для решения тех или иных конкретных задач. [c.7] Методики специфических анализов описаны очень подробно, для того чтобы читатель мог приступить к сбору данных, не теряя времени на подборку условий анализа. Несмотря на то что в литературе опубликовано большое число методик анализа, здесь приведены только те, которые чаще всего использовались в лаборатории авторов и были признаны наиболее удовлетворительными. [c.7] Ионообменная хроматография на колонках применяется в трех очень важных областях 1) для качественного и количественного аминокислотного анализа пептидов и белков, дающего ценную характеристику молекул его можно использовать Как средство обнаружения некоторых специфических различий среди белков 2) для определения аминокислотного состава биологических жидкостей, который дает не только существенную информацию о наличии свободных аминокислот, но и позволяет проследить за изменениями, происходящими в организме под воздействием многих факторов, таких, как окружающая среда, физиологическое состояние и генетическая конституция 3) для определения первичной структуры белков — чрезвычайно важной задачи биохимии сегодняшнего дня. Многие исследователи занимаются определением аминокислотной последовательности большого числа разнообразных белков. Это дает возможность установить их химическую структуру и изучить ее взаимосвязь с функцией. [c.8] Известно большое число методик, пригодных для точного количественного анализа аминокислот и пептидов (см. разд. 1.3). Обычно белки или пептиды гидролизуют до составляющих их аминокислот обработкой кислотой или щелочью при анализе биологических жидкостей белки предварительно отделяют. [c.8] Для определения аминокислотной последовательности применяют частичный гидролиз, используя ферменты (такие, как пепсин, трипсин, химотрипсин) или химические реагенты, достаточно специфичные по их расщепляющей способности. Однако анализ таких гидролизатов дает неполную информацию относительно последовательности аминокислот. Дополнительная информация может быть получена путем анализа С- и К-концевых аминокислот. Большая часть последовательности может быть установлена путем получения различной величины пептидов с перекрывающимися аминокислотными остатками при использовании целого ряда ферментативных и химических методов. [c.8] Ряд интересных применений таких методик описан Смитом [36], Бенисеком [37] и другими авторами [38—41]. [c.9] Выявление и массовое обследование метаболических нару шений, которые поддаются лечению, имеют решающее значение для терапии некоторых психических заболеваний. Многим методам обследования, которые используются для обнаружения отклонений, связанных с нарушением метаболизма аминокислот, недостает надлежащей специфичности и чувствительности для определения количества участвующих аминокислот. Несмотря на то что обычный и ускоренный методы ионообменной хроматографии обеспечивают необходимые чувствительность, точность и разделение, эти стандартные методы слишком длительны, для того чтобы их можно было использовать для обследования или химического анализа во время лечения. [c.9] Метод обнаружения в больничных условиях фенилкетонурии у новорожденных младенцев был описан Гутри 51]. При врожденной фенилкетонурии наблюдается недостаточное количество фермента, который превращает путем гидроксилирования фенилаланин в тирозин. Сакс [52] сообщил об изучении метаболизма фенилаланина, сравнивая нормальных душевнобольных пациентов и фенилкетонуроников. Дополнительные сообщения исследовательского характера включают аспекты аминокислотного метаболизма при ФКУ и других аминоацидопатиях [53], химические и метаболические исследования фенилаланина у олигофренов [54] и лечение злокачественных заболеваний путем ограничения содержания фенилаланина [55]. [c.10] Проведены исследования по определению содержания аминокислот в сыворотке крови больных инфарктом миокарда и другими сосудистыми заболеваниями [63]. Найдены значительные изменения в содержании некоторых аминокислот в сыворотке крови больных с поражениями миокарда. [c.10] Соответственно с накоплением знаний о метаболизме аминокислот для нужд клинического анализа появляется необходимость не только в увеличении скорости хроматографического анализа, но и в накоплении количественных данных о содержании аминокислот в цереброспинальной жидкости человека [72], свободных аминокислот в спинномозговой жидкости [73], свободных аминокислот в крови п моче [6, 74, 75] и свободных аминокислот в плазме крови новорожденных [76]. [c.13] Об изучении р-аланинурии у больных туберкулезом [77] и важности усвоения аминокислот в кишечнике сообщили Агар и сотр. [78]. [c.13] Несколькими исследователями разработаны ускоренные методы хроматографического анализа аминокислот не только для обнаружения многих врожденных дефектов метаболизма, о которых упоминалось выше, но и для быстрого анализа многих аминокислот физиологических жидкостей. Так, Льюис [79] использовал короткую ионообменную колонку для определения метионина и цистина. Для разделения при комнатной температуре была использована колонка размером 40X1.5 см, заполненная смолой зеокарб-225 ( 200 меш) пробу предварительно окисляли. При скорости течения буферного раствора 200 мл/ч цистеиновая кислота элюируется при объеме элюата 36—40 мл. [c.13] Вернуться к основной статье