ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Люминесцентная микроскопия в цитологии и гистологии. Прижизненное флуорохромирование из "Люминесцентный анализ" У подавляющего большинства биологических объектов их собственная неяркая люминесценция не позволяет проводить люминесцентномикроскопические исследования и для избирательного выявления определенных структур применяют люминесцентные красители — флуорохромы. [c.312] Флуорохромирование проводят либо прижизненное, либо на фиксированных препаратах. Прижизненное флуорохромирование в свою очередь может быть осуществлено или на целом н ивотном или растительном организме (путем инъекции или введения с пищей), или на отдельных тканях и клетках. Прижизненное флуорохромирование особенно полезно при исследованиях функционального состояния и физико-химической характеристики органов, тканей и клеток. [c.313] Живые и переживающие ткани и клетки, а также одноклеточные организмы, прижизненно флуорохромпруются непосредственно на предметном стекле, накрываются покровным стеклом и исследуются с помощью люминесцентного микроскопа. Чтобы препараты не подсыхали — покровное стекло прикрепляют к предметному парафиновой рамкой. [c.313] Если полное обезвоживание объекта нежелательно, то в качестве заключающей среды может быть использован винилин [8]. [c.313] Если флуорохромированные препараты не подлежат длительному хранению, то исследовать их можно в воде или в глицерине. [c.314] Фотографирование люминесцентных препаратов лучше всего производить на цветную негативную пленку, отличающуюся высокой чувствительностью (ЛН-3) можно также непосредственно получать диапозитив, используя для этого цветную обратимую пленку, чувствительную для дневного света. При фотографировании выгодно пользоваться окуляром с наименьшим увеличением. Продолжительность экспозиций — от нескольких секунд до нескольких минут. Бируковым разработаны специальные методы люминесцентной микрокиносъемки [11]. [c.314] Люминесцентная микроскопия принадлежит к наиболее тонким методам исследования структуры, биохимического, физико-химического и функционального состояния клеток. [c.314] Флуорохромы связываются с комнонентами микроскопических препаратов по-разному электростатически — связями типа солеобразных и более слабо — силами типа ван-дер-ваальсовых. Этим объясняется то, что, в зависимости от особенностей физико-химической природы, отдельные структуры и компоненты на срезах из тканей могут люминесцировать по-разному, хотя соответствующие препараты изготовлены с использованием одного и того нге флуорохрома. [c.314] Нередко контрастность свечения увеличивается за счет собственной люминесценции отдельных структур, кроме того, в ряде случаев флуорохромы растворяются только в некоторых из компонентов препарата (например, в жирах и липоидах). [c.314] Хорошие результаты в отношении цветовых различий и контрастов дает иногда применение смеси флуорохромов (или последовательная обработка одного и того же препарата различными флуорохромами). Флуорохромы подбираются при этом так, чтобы каждый из них контрастировал определенную деталь в препарате. Не меньшее значение имеет прием, позволяющий более или менее избирательно тушить или изменять цвет или интенсивность люминесценции отдельных компонентов объекта благодаря этому остальные компоненты, продолжающие ярко люминесцировать, могут быть выявлены особенно четко. Для такого тушения или легкого изменения характера люминесценции применяются красители слабо люминесцирующие (фуксин, магдаловый красный) или совсем не люминесцирующие (конго красный) или, наконец, известные тушители люминесценции (нанример, марганцевокислый калий). [c.314] В области зоологии и физиологии наибольшее значение люминесцентная микроскопия имеет для изучения функционирования отдельных органов животных, а также для определения состояния и жизнеспособности мелких животных, особенно паразитических и их личинок. [c.315] Для исследования функционального состояния органов животных в естественных условиях разработаны специальные методы витальной люминесцентной микроскопии с иснользованием различных опак-иллюминаторов и ультрапаков. Ультрафиолетовый или сине-фиолетовый свет, возбуждающий люминесценцию органов, падает на объект сверху, через объектив. В кровь или под кожу животному вводится раствор флуорохрома (на физиологическом растворе) и перемещение этого флуорохрома и его превращения в органе наблюдаются в люминесцентный микроскоп [49]. Этот метод был с успехом применен для изучения функциональной активности печени и почек [50—52] (см. рис. 77), для исследования нервной системы [53] и других органов. [c.315] Горюнова показала возможность определения состояния жизнедеятельности водорослей но характеру люминесценции хлорофилла в их клетках. [c.316] Вернуться к основной статье