ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Результаты из "Гель-хроматография" Состав системы растворителей на колонке с сефадексом G-25 можно изменить таким образом, что некоторые компоненты станут нерастворимыми и благодаря этому задержатся на колонке, в то время как растворимые компоненты будут элюироваться. Подобное явление имеет место, например, при дифференцировании по В. Эпштейну и М. Тану [152] так называемых эуглобулинов и псевдоглобулинов сыворотки человека. Если образец сыворотки в 1М поваренной соли поместить на колонку с G-25, уравновешенную предварительно очень разбавленным буфером, и элюировать тем же самым буфером, то вначале белки отделяются от соли. Хорошо растворимые в разбавленном растворе соли псевдоглобулины (главная часть белков сыворотки) элюируются с колонки гораздо раньше, чем Na l. Однако эуглобулины, отделившись от соли, становятся нерастворимыми. При дальнейшем элюировании они вновь растворяются в солевом растворе и так далее. В итоге они выходят с колонки вместе с фронтом поваренной соли. Порат [153] развил этот принцип дальше. Вначале в колонке с сефадексом G-100 создают возрастающий градиент концентрации соли (сверху вниз). Если теперь на колонку нанести смесь белков и элюировать водой, то компоненты смеси будут мигрировать быстрее, чем будет изменяться градиент соли. Таким образом, белки в соответствии с их растворимостью в солевых растворах выпадают в осадок в разных местах колонки, вновь растворяются по мере сдвига градиента и так далее. Таким путем (т. е. зонным осаждением) можно разделить белки одинаковых размеров, но с различной растворимостью. [c.200] В предыдущей главе на отдельных примерах мы рассмотрели возможные пути применения гель-хроматографии. При этом, подбирая иллюстративный материал, мы руководствовались лишь методическими аспектами и совершенно не принимали во внимание., к какому классу принадлежат исследуемые вещества. Такой подход был вполне оправдан, поскольку приемы при работе с веществами разных классов в значительной мере одинаковы. В разделах Гель-фильтрация и особенно Определение молекулярного веса рассмотрена значительная часть имеющихся экспериментальных результатов. В раздел же Гель-хроматография была включена лишь очень небольшая часть обширного материала, описанного в литературе (в основном из области биохимических исследований). Поэтому в настоящей главе речь пойдет главным образом о таких экспериментах, которые ранее-мы относили к гель-хроматографии в узком смысле. Эти данные в основном касаются разделения более или менее сложных смесей на относительно высоких слоях геля, поскольку присутствующие в них компоненты мало различаются по молекулярному весу. [c.211] Вернуться к основной статье